河口县爱德万甜

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河口县爱德万甜

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表S-10 莫奈林的氨基酸组成 单位:个
商业化甜菊苷提取精制方法,大多属于专利范围,为专利所有者掌握。从发 表的专利文献上肴,生产工艺包括用水或乙醇提取、脱色,之后用离子交换树脂 法、电解法或添加沉淀剂法进行提纯,后经结晶干燥而成。图4-4所示为一典 型的提取工艺流程。虽然可用乙醉类有机溶剂进行提取,但生产厂家更喜欢使用 水提取法。
许多甜菊苷生产流程均在后道的精制过程中使用f有机溶剂,诸如要去 除一些杂质可选用正丁醇及其醚或酯,有机氣化物或脂肪醇等。要使甜菊苷 结晶析出可选用甲醇或乙醇。结晶甜菊双糖苷A的较好溶剂为70%乙醉。 色谱分离可用多孔性凝胶或有机溶剂。要用色谱法分离出各种单一的双萜苷 可用烷基醇作溶剂。虽然色谱法精制分离效果很好,但还难于在商业化生产 中加以应用,在甜菊苷沉淀过程中,通常结合使用一些有机溶剂以去除色素 及一些杂质,最常见的沉淀剂是氢氣化钙。使用絮凝剂也可去除类似的 杂质。
在低能量焙烤食品中,必须用膨松剂来代替部分糖和面粉。供糖尿病患者的 食品也可用山梨糖醇和安赛蜜來保证必要的体积和甜度,其甜味和质构均类似用 蔗糖的产品。
尔比,反应混合物的熔点都在60T以下。复配有机溶剂的加人能保证该酶反应 在37^的均相中进行有效的反应。图2 -67 N-苄氧羰基-L-天冬氨酸乙酯和D -丙氨酰胺 按不同比例混合对反应混合物熔点的影响 注:12%的水.9%的DMSO和18%的MEA为辅助因子。
1.糖分子及其衍生物的多点结合模型D-果糖属于E,、E2、E3、E4型甜味剂,见图丨-20。而D-葡萄糖属于 B,、B2、AH,、AH2、XH_、XH2 型甜味剂,见图 1 -20 和图 1 -21。
尽管人们已提出部分假说来解释奇异果素的作用机理,但具体情况仍有很多 不明之处,Kurihara等人提出的假说认为:在酸环境中,奇异果素的糖蛋白分子 形状发生变化,使得多糖部分的阿拉伯糖一木糖能有效地接近并刺激甜味受体。 用蛋白酶进行改性处理会导致奇异果素的活性丧失,由此显示出蛋白质框架结构 对保持活性的重要作用。但用高碘酸钠处理使其碳水化合物部分发生氧化降解反 应,同样也会使其丧失活性,虽然氧化反应对分子中的蛋白质部分也会起作用。 现有人正在研究糖苷酶或糖羟基团的化学改性处理对奇异果素的活性的影响。
(2)通过对接计算而柑的两个Aoc - AB和10个分子嗦吗甜结合的观察阁 (淡绿色部分为T1R2,深绿色部分为T1R3,红色部分为嗦叫甜分子)过去,人们就已经发现甜味蛋白之间几乎不存在序列相似性和结构相似性, 但却依然认为它们与受体通过相同的机制相互作用。那么,它们的共同点是什么 呢?它们都在结构表面有一个相似的楔形结构,这一结构与受体的外部空穴发生 相互作用。大部分这些甜蛋白的相互作用面都有相似的静电性质,从而与活性位 点的静电势互补。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3'区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
提纯得到的嗦吗甜在各水平的RIA分析中均未进行交叉反应,也没有甜味, 这表明胞内嗦吗甜不会在细胞质中折费成甜味构型。

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