略阳县安赛蜜

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用固定化酶催化合成肽的反应条件优化要考虑3个因素:间定化酶的稳定 性、反应时间和平衡得率。图2-25 (1)所示为a = 15时,固定在Amberlite XAD-7的嗜热菌蛋白酶稳定性、平衡得率、相对起始反应速率。裁体内部最优 pH为5~6。当PH <5时,起始反应速率低且酶不稳定;pH >6时,平衡得率急 剧下降。在大多数情况下,多孔载体内的pH只由底物和产物的缓冲作用决定, 用酸或碱中和的方法很难调节。这是阂定化酶以非水溶性有机溶剂为介质催化合]’可增加酶的稳定 性,但得率仍会逐渐下降。在CSTR整个反应器中,底物和产物浓度各处均 相等。
利用从Af vinacea ATCC 20034中分离出的a -半乳糖苷酶,在上述三种有机 溶剂中将TCR水解为6-氣半乳糖和三氣蔗糖的反应过程,如图3-37所示。虽 然在甲基异丁基酮中,a-半乳糖苷酶水解TCR的反应速率达到了水相反应的 90% ,怛在每种溶剂中起始反应速率和最终产物浓度都比在水溶液中低。低反应 速率是由于在溶剂系统中,a-半乳糖苷酶有更高的A:?,而非一个更低的A:#。 因此在有机溶剂中,要获得和水相反应相似的反应速率,只能通过高底物浓度来 实现,但酶的活力因溶剂影响而快速降低。在所测试的溶剂中,酶的半衰期都不 超过3d。当TCR的水解度超过60%时,反应速率明显降低,因此要获得超过 80%的水解度就显得非常困难,必须使用很高的酶浓度并大大延长保温时间 (数天)。目前为止,还没有一种《-半乳糖苷酶能达到90%以上的水解度。
研究表明,乙酸稀溶液有利于6-PAS的生成,如2% ~ 10% (w/M;)。如图
4,_氣_4、脱氧_1, 4, 6-三氣_1,4,6-三脱氧-<*_[)_吡喃半乳糖 苷一办-D-呋喃果聚糖是蔗糖(5%)甜度的2200倍,4f-氣-4、脱氧-1, 4,6-三氣-1, 4, 6-三脱氧-?-丨)-吡喃半乳糖苷-办-0-呋喃塔格糖的甜 味是蔗糖(5%)的205倍。两者分子结构不同之处主要在于C-4'上卤素取代 基构象(图3-57),而甜度存在10倍差别,表明C-V上卤素取代基及其立体 化学结构对甜味影响起煎要作用。随着卤素取代基疏水能力的增加,氣-4' 一脱氧_?_D-吡喃半乳糖苷_1,6-二氣-4-齒代_1,4,6_三脱氧-卢一 D-呋喃果聚糖的C-4'卤代成分甜味递增顺序为:F>CI>Br>I,因此C-4'取 代基对研究4,-脱氧-4f -卤代蔗糖衍生物结构和甜味之间关系相当重要。
2.不同来源的《-半乳糖苷酶对产物的影响
R.C00H + NH2Rj—R,C0NHR2 + H20 (2-2)在缩合反应中,由于未反应的氨基和竣基的电离,使得反应主要朝起始物方 向移动,因而平衡得率一般都很低。当产物肽在水溶液中不发生沉淀时,将胺和 竣酸的电离考虑在内,表观平衡常数可由下式计算:
七、利用棉籽糖水解法酶法生产三氯蔗糖
相对于蔗糖、葡萄糖等可发酵碳水化合物型甜味料来说,链球菌(Streptococcus 咖廳) 作用于甜菊苷所生成的酸较少,表4-4所示为这方面的部分研究 结果。

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