和平县乳糖
注：①嗦吗甜的浓度5x10 c
从植物中分离得到的Brazzein有几种结构，其中主要构型中的末端氨基酸 是焦谷氨酸（pGlu)[围5-24 (1)]0另一构型除末端没有该氨基酸外，其 余均相同，称为de8-pGlul -Brazzein [图5-24 (2)]t它的甜度是主要构型 的Brazzein的2依。按des - pGlul - Brazzein的氣基酸序列采用大肠杆菌优选 密码子合成的基因如图5-24 (3)所示。合成的Bra^ein基因若直接克隆至 质粒 pET-3a、pET-9a、pET - 1 la 和 pET - 16b 得到的 Brazzein 表达水平均 很低，只有pET-3a和pET-9a得到少量可溶的Brazzein。pET载体通常能使 外源可溶性蛋白如葡萄球菌核酸酶表达，葡萄球菌核酸酶与Brazzein的显著不 同是葡萄球菌核酸酶的氨基酸数目>100，且没有半胱氨酸或半胱氨酸含S很 低。若采用两种基因融合生产目的蛋白融合体的表达水平较髙，因此将 Brazzein合成基因插人葡萄球菌核酸酶表达系统。该策略经大肠杆菌生产鸟类 卵黏蛋白区证实很成功。
阁6 - 4 251时糖枯钠/钙水溶液的相对密度与浓度的关系
+NH2S0,Na ?QH.jNHSOjNa + NH3 t
RGal-3和另一种未知结构的产物，但得率均很低。
由于嗦吗甜有8个二硫键，因此其分子十分稳定，其抗变性能比其他绝大多 数水溶性蛋白（如白蛋白或溶菌酶）都来得强。光谱分析表明，它的a-螺旋度 较低（大约只占整个分子14%),分析其氨基酸组成也可预测到这点。这表明它 并不完全是刚性分子，它的旁链大多处于可溶解的环境中。
由于酵母宿主中内源有对CYH敏感的L41基因，因此细胞中需有多个该标 记基因（3 ~ 10拷贝/细胞）以选择CYH抗性转化体。为增加每细胞中整合载体 的数目，通过从5#端缺失CYH抗性基因的启动子区域构建启动子缺失的CYH抗 性基因的质粒[图5-13 (1)]。该质粒在rDNA片段处线性化后转化至 尽管在亲代质粒PCLRE2 (图5-14)和pCLREll间没有显著的转化率差别，但 进一步的缺失会降低转化率。pCLRE15和pCLRE16的转化率约是pCLRE2的 15%，pCLRE17约是pCLRE2的0. 3%，PCLRFJ8则没有产生转化体。以丨41基 W在每细胞中的拷贝数为2计，经估计拷贝数最多的PCLRFJ7的拷贝数达到每
两非的当地居民早在几百年前就知道Brazzein这种物质了，人们要么生吃要 么煮来吃，也有人把它用作饮料或食品的甜味剂。
(一）人体对甜蜜素的吸收与代谢
公开。
