宁洱县甜菊糖苷
(四）由蔗糖直接合成S-6-a
对不同内阻下场强对转化率和活细胞的影响作了研究（图5 -18)。细胞悬 浮液与1叫经Bgi fl酶切的pCLRE2混合后在电容25jjlF下进行电脉冲转化，电 脉冲后，细胞在30T添加了 lmol/L山梨糖醇的YPD培养基上培养6h。在场强 为3.75kV/cun和内阻80W1时得到最高的转化率，约为1400个转化体/jxg线性 pCLRE2。在3. 75和5. 0kV/cm和内阻6(X)、800或100011时转化率较高[图 5-18 (1)]0这些条件下细胞存活率为10%?40%，实际脉冲时间为11 ~ 17ms [图5-18 (2)]。当内阻200或400ft时，转化率低。
{二）通过生物技术生产嗦吗甜
过在60弋保持lOmin，然后在4t、pH4.5条件下保持lh,可得接近单一组分的 莫奈林（经SDS - PAGE测定）。通过离子交换柱可进一步纯化，得率约为 100mg/10g湿酵母（700mg可溶蛋白〉。提纯得到的萸奈林与天然莫奈林甜度一 样，阈值丨网，通过CD光谱分析比较重组莫奈林和天然莫奈林的二级结构单 元，因此可以预料两者必然有相同的三级结构。
Wingwanl等人和DuBois等人用活体外试验证明小鼠盲肠微生物群能将甜叶菊 分解成甜菊醇。他们在小鼠盲肠中引入[MC]标志的甜菊醇，并从结扎的胆汁导 管和尿中回收到。Wingward等人认为甜菊醇是通过小肠吸收的，这个结论为 Nakyama等人的体内试验结果所证实。Nakyama的试验表明，虽然经氚标志的甜菊 苷未经任何吸收通过小鼠肠逬，但盲肠中的微生物群能将之分解成甜菊醇和葡 萄糖。
③甜度较高，一般都在蔗糖甜度的50倍以上。
图5 - 19 在非选择性培养箪培养50代后各转化体产物的SDS - PAGE图 注：箭头所指为单链莫奈林分子位
之后，又发现了第二个成功的例子/V- (V-甲酰甲氨酰）-天冬氨酰苯丙氨 酸甲酯[135],它的甜度与天冬氨酰苯丙氨酸甲酯相似。[131] ~ [135]的化 学结构如图2-77所示。
