建安区麦芽糖
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
因莫奈林厲于蛋白质分子，㈥此对热、pH敏感。水溶液加热至55~65X：就 会丧失甜味，室温下pH小于2或pH大于9时也会丧失甜味。相对来说，它对 酸（例如PH2.4)还比较稳定，但对碱很敏感。用胰蛋内酶、糜蛋白酶或菠萝 蛋白酶处理后，甜味随之丧失^但用羧肽酶进行有限的蛋A质水解，仍会保持部 分甜味。未经变性处理的天然莫奈林分子，因其三级结构较为紧密，在一定程度 上可抵抗蛋H酶的水解。用8m?l/L的脲或十二烷基硫酸钠之类蛋白变性剂处理， 会引起甜味的不可逆丧失。但因用6mol/L胍盐酸化物处理所导致的甜味丧失现 象是可逆的，去除溶剂后其甜味有可能得以完全恢复。
A链：.梢?谷■异亮?赖.?酪?谷?酩?谷氨酰肢?(奚> ?酪?缬?酪?丙?背■天■賴 .亮?笨丙.潘?丙?天?异亮.丝.天.m w .甘.裕?賴.亮?龙.格 ?苯丙?天冬酰胺.甘.?缬?脯.M . ''tf B链：货?谷?色.谷?古4 ■异亮.天.异亮.甘? .苯丙.苏.谷氣m胺.天冬酸胺? ?
(2)奇异果家二聚体[第-和第二条祕体分別以绿色和蓝色表示并分别记为H链和I链。
在酒精中，安赛蜜的溶解度很小，20弋时在无水乙醇中溶解度仅为lg/L。 但是，在乙醇中加入少留:的水可大大提高安赛蜜溶解度，所以安赛蜜溶在醇-水 混合液中作调味品或口腔卫生产品，不会发生溶解度问题。在水-乙醇混合液 中，溶解度随着含水里的增加而增大，在50%乙醉液中达到100g/L (表6-4)。 安赛蜜的稀溶液几乎是中性的。
阁3 -49 4,丨\ 4’，6、四氣-4, 4'，6,-四脱氧-半乳糖基-蔗糖的合成蔗糖的6，\\ 6^-三氣衍生物其甜度是蔗糖的25倍，但当其2-羟基被氯 取代后（图3-50)，并经构型转化成为甘露糖异构体时，生成的2，6\ r, 6'-四氣衍生物就与奎宁一样苦。这证实了 a-羟基对保持甜味很東要，而且强 调了甜味剂生甜闭三角形的排列有着严格的空间要求。为了提髙D-葡萄糖、麦 芽糖和海藻糖的甜度而引人氣取代基团，制备了诸如6 -氣-6 -脱氧-D-葡萄 糖、4', 6'-二氣-4\ 6、二脱氧-麦芽糖和4，6-二氣-4，6-二脱氧-海 藻糖之类的化合物，但均未取得好的效果，这些衍生物有的还不如母体糖甜，而 更多的却是苦的。人们也对4 -氣-D -半乳糖及简单的糖苷衍生物的甜味特性 做了鉴定，它们同样没有甜味。这更证实了横跨蔗糖分子的羟基团，对维持蔗糖 的甜味十分重要。图3-50 2, 6\ r, 6'-四氧-2，6\ 6、四脱氧-过餺-蔗糖的合成
2.酶源对转糖苷产物的影响
阁3-32反应时间对H氣蔗糖得率的影响
5.5(与阿斯巴甜的很接近）D
