城阳区糖精钠
柚昔二氢查耳酮的最初原料柚苷在国外有市售，小批量的可通过葡萄柚皮制 得。制备时，先将葡萄柚皮与少量的50%冷甲醉溶液混合几秒钟后过滤，滤液 在冰箱中放罝数日，以使其结晶完全。然后将晶体溶于水中进行重结晶，真空干 燥后柚苷晶体的熔点由80$上升到1711。
(二）糖精在机体组织中的分布
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
表2-10 阿斯巴甜的应用范围
概括说来，人们应用各种先进的现代分析技术大多没有发现糖精柝参与代谢
Kohmura和Ariyoshi等通过Fnioc策略用固相合成法合成了马槟榔II，合成 步骤是：
研究发现，PFR的生产效率一般要比CSTR的髙^当两者的合成速率相同 时，CSTR内部的反应条件与PFR出口处的反应条件相同，因此此时CSTR的 Z-Asp浓度较低，固定化酶内部pH比PFR入口处稍高。试验证实在CSTR中反 应可连续进行。图2-26显示在51 = 0.95外时，反应得率为90%可持续300多 小时。用上述条件，在lm3CSTR中，用400kg湿固定化酶，可生产10〖阿斯巴 甜。尽管固定化酶用于实际工业生产阿斯巴甜还存在许多问题，但这结果说明酶 法生产很有前景。如果能在PFR中实现连续化反应，则效率将会更髙。在另一 研究中，通过降低温度至25T,并同时降低底物浓度的方法，在PFR中实现了 连续化反应，在外=1. 85/h下固定化酶柱的稳定可保持500h。
温度对味觉有影响，最能刺激味觉的温度在10之间，其中以30弋最 为敏感。低于或髙于此温度，各种味觉都会减弱，如甜味在501以上时，其感 觉显著迟钝。
