金安区甘露醇
本法只需以葡萄糖和蔗糖为前体，但要通过发酵产生G-6-a，这是一个昂 贵的过程，因为它需要杀菌操作及分离除去G-6-a中的葡萄糖。此外，虽然 果糖转移酶反应可以在高底物浓度下进行并获得较髙得率的S - 6 - a，但分离提 纯S-6-a则是困难的，因为所有试图结晶出S-6-a的努力都不成功，它只能
柚昔二氢查耳酮的最初原料柚苷在国外有市售，小批量的可通过葡萄柚皮制 得。制备时，先将葡萄柚皮与少量的50%冷甲醉溶液混合几秒钟后过滤，滤液 在冰箱中放罝数日，以使其结晶完全。然后将晶体溶于水中进行重结晶，真空干 燥后柚苷晶体的熔点由80$上升到1711。
(二）构象分析
1.反应时间和加酶最的影响
由于Bntzzdn独特的科研和产业应用价值，大蛩生产高纯度的Brazzein成为 产业界的目标。Brazzein在天然植物中含量甚微，提取困难，产最受到限制。因 此利用基因工程，在其他宿主中表达该外源基因是快速冇效的途径。美国Nektar Worldwide公司已将Brazzein表达至玉米中，It转基因玉米中能提取1kg Brazzein。 另也曾尝试在酵母中表达合成Brazzein，但没有成功。这里讨论用大肠杆菌表达 Brazzein 基因。
C-6位羟基的单基团保护是本制备法的核心步骤，要求所形成的中间产物 对氣化试剂稳定，而又易于脱除。其中，最适用的方法是酯类保护法，因为它兼 具引入方便、在所需反应条件下稳定以及易于除去等优点。通常选择羧酸的活泼 衍生物作为酯化试剂，其中最常用的是酰基酐或酰基卤。对蔗糖来说，形成乙酸 酯或其他羧酸酯娃最有效的保护醉羟基方法，这可以使它在随后的酸性条件中不 受影响。
甜菊苷可用于口香糖和泡泡糖及用于制造有各种风味，如番木瓜、菠萝、番 石榴、苹果、橘子、葡萄或草莓风味的软糖。甜菊苷还可与山梨糖醇、甘氨酸、 丙氨酸等混合用于蛋糕粉。因甜菊苷对热稳定，因此特別适合于这方面的用途。
也可以通过烟草表达莫奈林。首先合成了由噬菡体PI Cre重组酶介导的特异 ?组位点丨OXP的序列，构建了两个loxP同向重复的棺物表达栽体pGLX121. 1。 PCR定点突变了 CaMV 35S启动子元件中kozak序列，使kozak中的翻译起始密码 子ATG位于Ncol位点上。把spm基因克隆到表达载体pG〖MA的Ncol和PstI之 间，给甜蛋白8pm基因加上35S启动子和polyA及NOS终止子元件，然后克隆到 PGLX121. 1的EcoRI位点上，用农杆菌LBA4404转化烟草，获得卡那痗素抗性转 基因植株，经过PCR及southern分析，证明甜蛋白spm基因已整合到烟荩基因组 内。用转基因烟草的总RNA通过RT-PCR反转录扩增spm基因，证明了在35S启 动子及其他调控元件的控制下，spm基因在转基W烟草中转录表达出mRNA。提取 转基因烟草总蛋白，经SDS-PAGE分析，初步证明了 8pm基因在转基因烟草中表 达出目的甜蛋白。
明石等人分别用0. 28%、1.40%和7. 00%的甜叶菊水提取物喂养大鼠3个 月，发现处理组和控制组之间在行为、粪便外观、毛的光泽、食物摄取数堂以及 尿的成分等方面均没明显的差别，但7.00%组出现了明显的体重下降现象。两 组动物在血液等方面表现正常，经病理检查也未发现明显的差别。为此作者认为 用含0% ~7%甜叶菊提取物的饲料喂大鼠3个月没有毒性。
