广昌县乳糖醇
表4 -24 M. vinacea的a -半乳糖苷酶催化甜叶悬钩子苷
将苯酐和冷冻的氨水依次加入酰胺 化反应锅内，升温后缓慢加人氢氧化钠 溶液，调pH = ll?12，保温0.5h反应，
通过气相扩散法往含奥奈林的缓冲水溶液中混合人20%乙醇，可制得莫奈 林结晶体。晶体大小约0. 5mm x0. 5mm x0. 4mm，形状规则，正交晶系，具有强 烈的双重折射特性。莫奈林晶体甜度非常髙，说明肽链在晶体结构中并未离解。
立的。
③环原酸酯法（单基团保护法）；
当研究一类蛋白质的共同功能的起源时，研究人员一般都是通过比较序列 和/或三维结构来寻找这类蛋白质成员的对应部分。然而，人们至今仍未在莫奈 林、嗦吗甜、Brazzein、马槟榔、奇异果素和Curculin中发现序列同源性。通过 Clustal X得出的双序列比对结果表明，莫奈林和其他甜蛋白（嗦吗甜、Brazzein、 马槟榔、奇异果素和Curculin)的相同残基百分比为：莫奈林和奇异果素之间 23% ,莫奈林和Curculin之间仅为7%。如果把鸡蛋淸溶菌酶也考虑进去，那么， 所得的结果[图1-30 (1)]是这些蛋白质完全不存在对应性（mis-alignment): 仅有3个部位具有少许同源性。即使把序列比对仅局限在三种最甜的蛋白（莫 奈林、Brazzein、嗦吗甜>，也只能发现2个相同部位和12个具有同源性的部位 [图 1-30 (2)]。图1-30 甜味蛋白的序列比对 (I)典奈林、嗦叫甜、BraHein、4槟梅、奇异果家、仙茅蛋甶和鸡蛋淸溶菌酶的比对 <2)奂奈林、嗦吗甜和Bra/zrin的比对比较现有的甜蛋白（莫奈林、嗦吗甜和Brazzein)的三维结构，也儿乎没宥 发现它们之间存在任何的相似性。Brazzein、莫奈林和嗦吗甜三维结构的惟一共 同点是二级结构的一个小K域，即符合甜味指要求的办-折登发夹结构，这一结 构具有已在小分子甜味剂所确定的生甜团。
Kondo等人曾尝试构建一 SCM质粒并在C— idilis中生产SCM。他们把 SCM基因插入由产脘假丝酵母(C. utUis)克隆来的GAP基因的启动子和终止子 片段之间。通过这种方式，他们获得了高产虽的SCM，表达水平高于总可溶性 蛋白的50%。他们还尝试克降带S. cerevisiae GAPDH启动子的SCM基因用来生 产SCM。然而，所得的产最水平很低，仅为总可溶性蛋白的5%左右。美国一专 利公开了利用P. pastoris生产SCM的方法。首先将合成的SCM基因克隆于含有 S. cerevisiae a -因子分泌信号和GAPDH启动子的PGAPZa -载体，然后将构建的 质粒转化成P.P^tori5GS115，最后通过菌株对Zcocin的阻抗性，对转化株进行 筛选。观察发现所分泌的.1：组英奈林为一条12kji的带。SDS - PAGE分析表明， 通过该方法可获得约10g/L的SCM。这些SCM经纯化后可引起甜味。
在各种致突变试验研究中，包括强致死试验、微核试验（micronucleus test)、伢髄试验、恶性转移试验、DNA结合试验等，均未发现安赛蜜有任何致 突变现象。用白鼠进行繁殖试验，表明安赛蜜对试验动物的生育能力、每窝小动 物总数、动物体苽、生长情况和死亡率等均没任何影响。
图6 - 10 Remsen - Fahlberg糖精合成途径
甜蜜素钠盐的分解温度为280T，不发生焦糖化反应，10%水溶液呈中 性，pH6.5D钙盐的分解温度为50CTC，10%水溶液pH为5.5 ~7. 5，在水 溶液中呈钙离子强电解质，易与果汁中的有机酸类作用，也可使乳中蛋白质 凝固。
