汉南区甘草甜素
(一）反应原理和步骤
因为所有的动物体内研究，包括长达2年的慢性毒理试验均表明甜菊苷是无 毒的，因此上述的试验结果已引起人们的关注，但甜菊醉是在小白鼠体内产生 的，白鼠的微生物群系与人体的有所区别，且试验所用的甜菊苷浓度至少是正常 食品中可能使用量的丨00倍以上。在消化道内浓度的稀释必然极大地减少了可能 发生突变的机会，因此，对这个实验结果不必太紧张。
发酵生成的G - 6 - a必须在特定酶的作用下从蔗糖中转移果糖基单元，才 能最终生成S-6-a。已知蔗糖合成酶可以合成蔗糖，但它却不能合成S-6-a。 而蔗糖-6 -磷酸盐合成酶尽管可以合成蔗糖-6 -磷酸酯，但蔗糖磷酸酯化物由 于对氣化反应不稳定而不能作为C -6位羟基的保护基团，因此该酶也不适宜在 蔗糖的单基团保护中应用。葡糖基转移酶如环状糊楮葡糖基转移酶，因不能高效 地将中.糖基团转移到果糖上，而不能用来形成蔗糖和蔗糖酯化物。此外，菊粉酶 (Inulinase)也不能生成S-6-a。虽然将蔗糖6 -果糖基转移酶作用于蔗糖和 G-6-a可以获得低得率的S-6-a,但它却要求极大过量的蔗糖参与反应，且 易造成聚合产物和水解产物占优势地位，因此也不适宜用来合成S-6-a。
酸而形成的三肽进行研究（表2-63)。化合物[152]没有甜味，若将它的第 二个Gly替换成D - Ala或将其第三个Gly替换成L - Ala,这样产生的化合物 [153]和[154]却带有一点甜味。对于第二和第三个氨基酸来说，较为理想的 构型分别是D-型和型。经优化后的三肽化合物[丨55]和[156]，其甜度适中。表2-63三肽化合物的结构与甜度注：括号内为SukchilD等人的数据。
目前已有多种含巯基试剂如氧化型谷胱甘肽和胱氨酸用于蛋白质折黉复性， 其中采用胱氨酸比用氧化型谷胱甘肽成本低。将含巯基化合物胱氨酸合成蛋白 质-巯基半胱胺化合物阻隔游离的蛋白质巯基，这样可以有两个好处：变性蛋A 的水溶性敁著提高；只有加人弱还原剂后巯基才能进行相互交换。用还原型胱胺 化合物从变性蛋白质生产天然嗦吗甜的折叠过程如图5-5所示，最终得率提高 至约5pg/mL (25%),可以用品尝试验测定。酵母嗦吗甜A、B折垒复性的得率 较低，酵母嗦吗甜I不能折奋成天然（甜味）构型。酵母嗦吗甜的N端氨基酸 (一内氨酸）虽被乙酰基阻隔，但经-?系列试验证明这种修饰对蛋白质折替及甜味 没有影响。这些结果表明：嗦吗甜丨和A的另一个不同的氨基酸即第113位的 氨基酸可能不是天冬酰胺而是天（门）冬氨酸。
表6 - 1所示为糖精、糖精钠和糖精钙的主要物化性质。
以嗦吗甜基因中322bp Ncol片段作为探针，与九awamori基因组中的单拷贝 gdhA基因杂交的694bPPvuII片段作对照，对转化体进行DNA印迹杂交分析以估 计各转化体中嗦吗甜表达盒的数最。分析表明，在各转化体的表达盒没有发生重 排，各拷贝数为5~14 (表5-9),表达盒的拷贝数与嗦吗甜产率有明显的相 关性。
巳知有些植物蛋白的消化性较差，为此对嗦吗甜的可消化性做了研究。人体 消化酶活体外试验表明，嗦吗甜比鸡蛋淸更容易消化，大鼠试验结果也证实了这 点。这个试验是用5%嗦吗甜和5%鸡蛋淸蛋白作为交叉试验的唯一蛋白质资源。 结果表明，鸡蛋清的消化率为（89.9 ±0.5)%，而嗦吗甜为（91.2 ±0.5)%o 这表明嗦吗甜的消化率至少与鸡蛋清的一样，而鸡蛋清蛋A则是公认最易消化的 食品蛋白质之一。嗦吗甜的生物学价值为（55.6 ±1.5)%，比鸡蛋淸蛋白的生 物学价值（69.0±丨.5)%低些，这是因为它缺乏大鼠生长所必脔的组氨酸的缘 故。这个试验还表明，如果将之作为大鼠生长的唯一蛋白质来源也没明显的不 适，只要添加些含组氨酸的蛋白即可。用3% ~8%的嗦吗甜喂养大鼠和狗，它 们的生长情况良好，体重正常。
究，他们以100mg/kg或500mg/kg标准喂养雄猴，每周喂养5(丨，12年后没 发现任何异常现象。然而他们没有说明这些猴子是否具有将甜蜜素转变成环 己胺的能力，但是假定它们的转变能力类似人类。这些研究的重要意义在于 证实了即使给次人类灵长U猴喂养很大剂谊的甜蜜素，也没发现任何相反的 结果这一事实。
