全南县爱德万甜
表4 -27 不同来源的《 -半乳糖苷醵催化甜叶悬钩子苷的转糖苷反应产物
(2)通过对接计算而柑的两个Aoc - AB和10个分子嗦吗甜结合的观察阁 (淡绿色部分为T1R2,深绿色部分为T1R3,红色部分为嗦叫甜分子）过去，人们就已经发现甜味蛋白之间几乎不存在序列相似性和结构相似性， 但却依然认为它们与受体通过相同的机制相互作用。那么，它们的共同点是什么 呢？它们都在结构表面有一个相似的楔形结构，这一结构与受体的外部空穴发生 相互作用。大部分这些甜蛋白的相互作用面都有相似的静电性质，从而与活性位 点的静电势互补。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
糖分子与甜受体相互作用的3种机理
(三）邻甲基苯胺法
反应时间/b
阁4-3等甜度甜菊背、蔗糖及廿草甜素水溶液的甜味分布曲线 1—荊糖2_甜菊苷3—甘草甜素
已有人进行甜叶菊S. rebauduma植物的改性育种研究。日本报道了对该植物 进行细胞组织改性后培育出的植株其双糖A苷含最是原来的2. 56倍。在这种植 株中，双糖A苷的含与甜菊苷相等。总之，甜菊双糖A苷以其更优、更好于 甜菊苷的特性而引起人们浓厚的兴趣，不少人正致力于商业化生产技术的研究。
