旌阳区海藻糖
由于酵母宿主中内源有对CYH敏感的L41基因，因此细胞中需有多个该标 记基因（3 ~ 10拷贝/细胞）以选择CYH抗性转化体。为增加每细胞中整合载体 的数目，通过从5#端缺失CYH抗性基因的启动子区域构建启动子缺失的CYH抗 性基因的质粒[图5-13 (1)]。该质粒在rDNA片段处线性化后转化至 尽管在亲代质粒PCLRE2 (图5-14)和pCLREll间没有显著的转化率差别，但 进一步的缺失会降低转化率。pCLRE15和pCLRE16的转化率约是pCLRE2的 15%，pCLRE17约是pCLRE2的0. 3%，PCLRFJ8则没有产生转化体。以丨41基 W在每细胞中的拷贝数为2计，经估计拷贝数最多的PCLRFJ7的拷贝数达到每
催化反应的产物的彩响
图6 - 2 25弋时糖梢钠/钙水溶液的 相对黏度与浓度的关系曲线
(一)质粒构建
Unilever已成功地生产出嗦吗甜II及嗦吗甜分子的前体化合物，这一杰出成 就是通过多年的努力，应用遗传工程方面的最新知识完成的。有两篇专利文献对 这种生产方法做T相当详细的描述。其中一篇描述的娃利用重组DNA技术把植 物基因的遗传信息引人大肠杆菌{Escherichia coli)细菌寄主细胞内，将“设计 好”的DNA适时移人细菌体内就可生成嗦吗甜蛋白。第?.篇描述的是重组[)NA 分子的结构，它可产出嗦吗甜分子的前体化合物。嗦吗甜D分子的氨基末端有额 外的22个氨基酸，羧基末端也冇额外的6个氨基酸。这种伸长的分子有助于微 生物细胞更易排出蛋白质，因此增加了应用时的经济效益。遗传工程的另一个任 务就是通过基W突变使嗦吗甜分子发生特种变异，以观察其对产品甜度及其他特 性的影响。然而，就H前来说，要把这些实验成果转变成商收化规模生产尚冇不 少困难。另一种适合用来生产嗦吗甜的寄主是酵母或其他无毒性的发酵微生物， 因酵母的食用历史很长，对有关管理部门以及最终消费齐来说吸引力更大些。
A链：.梢?谷■异亮?赖.?酪?谷?酩?谷氨酰肢?(奚> ?酪?缬?酪?丙?背■天■賴 .亮?笨丙.潘?丙?天?异亮.丝.天.m w .甘.裕?賴.亮?龙.格 ?苯丙?天冬酰胺.甘.?缬?脯.M . ''tf B链：货?谷?色.谷?古4 ■异亮.天.异亮.甘? .苯丙.苏.谷氣m胺.天冬酸胺? ?
用异香草醛（3-羟基甲-4-氧基苯乙醛）与\11缩合可得到新橙皮苷。在 一个典型的试验中，将VI (5. 64g)添加于热的氢氧化钾溶液中（12g氢氧化钾 溶于12mL水），罝于沸水浴中，异香草醛（2.82g)可分次加人。加热约7min 后，用70g冰冷却溶液，调节pH至5. 7,然后置于冰浴中过夜。这样生成的沉 淀物主要是新橙皮苷査耳酮。收集沉淀，水洗，气流干燥之。为了使其环化成黄 烷酮，可将它重新溶解于70mL的水中，先在80 下持续30min,然后在 401下维持3h，真空干燥后可得到纯净的新橙皮苷晶体（熔点241?242T，产 ft3. 17g)。少量未反应的\U，可用冰浴冷却后过滤去除。
到lOOt时达到lOOOg/h以上（图6 - 22〉。
表5 -11 构成莫奈林IV两条肽链的氨基酸顺序
(一）嗦吗甜的风味增强特性
