房县山梨糖醇
四、其他基因工程法生产莫奈林
Jin等人为了进一步探求Brazzein的结构-功能关系，在猴子和人体身上进行 了试验。以des-pGlu Brazzein、25 Brazzein突变体和英奈林作为刺激物，将所有这 些蛋白质都溶解至浓度为HXVg/mL的溶液，调节pH至7.0。在猴子试验中， Jin等人通过观察个别的S味觉纤维来记录猴子对上述几种甜味剂的甜味刺激反应。 S纤维的选择标准是它们对甜味刺激的敏感度^在人体试验中，受试人对甜味刺激 物的甜度进行评分，接者把人体试验结果与猴试验电生理学结果进行分析对比。
(四）反应条件的优化
棉籽糖是蓆糖分子的Glc (葡萄糖）一侧再接上一个Gal (半乳糖），是一 种三糖分子。由于棉籽糖的Gal基正好位于蔗糖C-6位，充当着C-6的天然保 护基团。因此，本方法是以棉籽糖为原料，直接进行选择性氣化制得6，4\ \\ 6"-四氣棉籽糖，再经a -半乳糖苷酶水解去除Gal-6-Cl即得三氣蔗糖。
环己胺的毒性是决定甜蜜素日允许摄人最ADI值的依据。中毐现象是出 现T睾丸萎缩、睾丸重萤减少等现象。在处理有关甜蜜素和环己胺试验数据 时，这是唯一的也是二直出现的毒性，它已引起人们的关注。但在大鼠身上 进行的大剂萤试验结果是否适用于人体很值得怀疑，因为大剂萤生物试验对 人和动物所出现的结果并不一样，在人体中只有很有限的甜蜜素经代谢作用 生成环己胺。
虽然Vilsmeier试剂选择性很好，但由于反应温度和酸度高，控制不当舄炭 化和水解，而且反应过程中所产生的S02、HC1气体腐蚀性较大，需对其进行特 別处理。而使用三苯基膦_0(：14进行氣化，反应条件温和。具体方法是，将 6-PAS溶于吡淀后冷却至(TC,在OtT分别加入三苯基膦和CC14,逐步升温至 70^,恒温反应3h。加人甲醇终止反应，真空浓缩至干后加入丙酮，去除不洛 物后浓缩，最后加乙醚结晶，经过滤、重结晶得到浅黄晶体产物。三苯基膦与 6-PAS的摩尔比分别为7:1、6:1、5:1、4:1，与CC14的摩尔比均为2: 1，结果 如图3-25所示。从曲线趋向看，三苯基膦过量越多，越利于TOSPA生成，但 从经济角度出发，考虑到三苯基膦过貴所增加的生产成本，控制其配比为6:1， 此条件下得率为51.8%。图3-24反位温度和时间 对氣化得韦的影响图3-25三笨基膦与ca4摩尔比 对TOSPA得率的影响
对CGTase催化得到的甜叶悬钩子苷的转糖基衍生物的甜质和结构关系研究 发现，在13-0H相连的葡栅基上进行转糖基化，甜度和甜质有明显改善，而在 19-羧基相连的葡糖基上进行转糖苻反应，则甜味和甜质变差。因此要对甜叶悬 钩子苷进行选择性修饰。
(-)从甜菊叶子中提取甜菊双糖A苷在过去的10多年中，人们作了很大的努力企图从甜菊叶子中提取双糖A苷 进行商业化生产。已知提取T.艺中用来分离甜物质的是髙度极性溶剂——水，这 是因为甜菊苷仅微溶于水而双糖苷A在水中的溶解度很大。通过浓缩去掉水， 然后再用甲醇提取即可优化先分离出双糖苷A产品，但其中还含有部分甜菊苷。 去除甲醇后通过二氧化硅胶柱采用丙醉-水-乙基乙酸盐溶液作流动相进行色谱 分离，再在戊醇水溶液中通过重结晶方法即可得到纯净的甜菊双糖苷A。通过这 种方法，可从叶子中提取出0.25%的结晶双糖苷A。而不经色谱分离则可从干
