荆州区D-木糖

荆州区D-木糖
图5 - 5 变性嗦吗甜体外折叠至天然构塑的操作流程
为检测酵母嗦吗甜是否具有甜味构型开发了 WA检测方法（radioirmmmoassay, 放射免疫分析法）。小鼠接种纯嗦吗甜A后会产生单特异性抗体（monospecific antibodies),它的免疫血淸稀释约50000倍后能选择性地与天然（甜味）构型的嗦 吗甜发生反应，时非天然构型、变性嗦吗甜或嗦吗甜的肽段与抗体的结合能力远不 及天然嗦吗甜。RIA可测定的嗦鸣甜最低浓度为Ing/mL，敏感度约是感官品尝试 验的丨000倍，并且适用范围也更广，对粗提物等都可以测定。将溶于SDS的酵母 嗦吗甜经SDS凝胶电泳分离后转移至硝化纤维滤纸富集，用稀释2000倍的老鼠嗦 吗甜A血清抗体进行检测，发现富集后的变性嗦吗甜及其溶解在SDS中的部分都 能被该血清抗体识别，该被识別组分在电泳中与植物嗦吗甜一起发生迁移。但对酵 母提取物进行RIA分析，没有发现能发生交叉反应的可溶性蛋A质，这可能是由 于酵母细胞内的还原态环境使嗦呵甜的二硫键还原而使蛋A质发生变性沉淀，因而 细胞中就+存在天然水溶性的嗦吗甜。并且由于蛋白质N端没有连接分泌信号序 列，细胞不分泌蛋白质。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
1980年，Sweatman和Renwick用经过系统安排其生活方式的白鼠做试验， 观察糖精摄人后在机体血液、尿和各组织中的分布。他们让白鼠摄入含 0% ~10%糖楮的饲料维持22d，跟踪在24h内血液中糖楮浓度的变化情况及糖 精在各机体组织中的分布情况。研究发现在肺、肝、肾、脾和肾上腺中的浓度较 髙，肠道、肾、泌尿膀胱中的浓度较机体整体平均浓度髙，膀胱与尿中糖精浓度 比值为1:100。据此，作者认为糖精通过尿向膀胱的扩散渗透率有限。这一结论 与他们的早期结论一致，但与Co丨burn所报道的正好相反，因Colburn认为白鼠 膀胱对糖精的吸收率很明显。这一差异的部分原因在于两个试验对动物膀胱的操 作控制情况不同，Kemvick和Sweatman所采纳的方法是用镊子或轻轻触摸膀胱以 排出尿，这样造成尿的表观渗透率增大。
为了改善嗦吗甜的甜味特性，可以将它与其他甜味剂相混合以缩短其甜味持 续时间。或把它应用在那些能够充分发挥这种甜味剂优点的产品（如口香糖）， 这样就不需对之加以改性。
Goodman等人提出一种“后向旋转” 二肽酰胺的甜味模型，他们用NMR法 对丙氨酸酰胺（D-型[86]有甜味，L-型没有甜味）及其相应的“后向旋 转”酰胺（R-型[94]有甜味，S-型[95]有甜味）进行研究。假设肽键是 反式的且两性离子天冬氨酰基团的形状近似为一个平面，结合：①偶联常数 [J (VH」H>];②核极化效应；③温度对NH化学位移的影响这三方面的因 素，分析这些化合物的立体构象。通过计算所需的能量最低值，表明只有一种低 能量构象符合NMR的分析结果。图2 -84描绘了带有阿斯巴甜的甜味结合模型, 其中阿斯巴甜的构象与它在晶体结构中存在的构象很接近。阁2 - 84 连有阿斯巴甜分子的甜味结合模助 注：箭头所指的键由品体结构軔箭头方向旋转140%
③4位乙酰基迁移至6位。
图6-24 安赛蜜（原始浓度丨00%)在温度40t (1)和25*€ (2)时. 不同pH下IT:藏时间（月）与保留未分解的百分率的关系
在蔗糖的化学改性以寻求新的甜味衍生物过程中，4，1#，6'-三氣-4, \\ 6、三脱氧半乳蔗糖（4, r, a^tn-chloro-galactosucrose, TGS，简称“三氣廉 糖”）是其中已产业化的一种甜度最大、味觉特性最好的衍生物，英国Tate &? Lyle公司的商品名为Sucrabse (又称“蔗糖素”>。由于其品质优乘，安全可靠， 美国FDA于1998年3月21日批准使用，同时还得到全世界如加拿大、澳大利 亚、俄罗斯和中国等很多国家的批准。