荆州区D-木糖

荆州区D-木糖 图5 – 5 变性嗦吗甜体外折叠至天然构塑的操作流程 为检测酵母嗦吗甜是否具有甜味构型开发了 WA检测方法(radioirmmmoassay, 放射免疫…

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图5 – 5 变性嗦吗甜体外折叠至天然构塑的操作流程
为检测酵母嗦吗甜是否具有甜味构型开发了 WA检测方法(radioirmmmoassay, 放射免疫分析法)。小鼠接种纯嗦吗甜A后会产生单特异性抗体(monospecific antibodies),它的免疫血淸稀释约50000倍后能选择性地与天然(甜味)构型的嗦 吗甜发生反应,时非天然构型、变性嗦吗甜或嗦吗甜的肽段与抗体的结合能力远不 及天然嗦吗甜。RIA可测定的嗦鸣甜最低浓度为Ing/mL,敏感度约是感官品尝试 验的丨000倍,并且适用范围也更广,对粗提物等都可以测定。将溶于SDS的酵母 嗦吗甜经SDS凝胶电泳分离后转移至硝化纤维滤纸富集,用稀释2000倍的老鼠嗦 吗甜A血清抗体进行检测,发现富集后的变性嗦吗甜及其溶解在SDS中的部分都 能被该血清抗体识别,该被识別组分在电泳中与植物嗦吗甜一起发生迁移。但对酵 母提取物进行RIA分析,没有发现能发生交叉反应的可溶性蛋A质,这可能是由 于酵母细胞内的还原态环境使嗦呵甜的二硫键还原而使蛋A质发生变性沉淀,因而 细胞中就+存在天然水溶性的嗦吗甜。并且由于蛋白质N端没有连接分泌信号序 列,细胞不分泌蛋白质。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3’端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 – 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral – Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl – Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl – KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl – PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 – 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3’区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll – Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD – Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI – Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl – PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
1980年,Sweatman和Renwick用经过系统安排其生活方式的白鼠做试验, 观察糖精摄人后在机体血液、尿和各组织中的分布。他们让白鼠摄入含 0% ~10%糖楮的饲料维持22d,跟踪在24h内血液中糖楮浓度的变化情况及糖 精在各机体组织中的分布情况。研究发现在肺、肝、肾、脾和肾上腺中的浓度较 髙,肠道、肾、泌尿膀胱中的浓度较机体整体平均浓度髙,膀胱与尿中糖精浓度 比值为1:100。据此,作者认为糖精通过尿向膀胱的扩散渗透率有限。这一结论 与他们的早期结论一致,但与Co丨burn所报道的正好相反,因Colburn认为白鼠 膀胱对糖精的吸收率很明显。这一差异的部分原因在于两个试验对动物膀胱的操 作控制情况不同,Kemvick和Sweatman所采纳的方法是用镊子或轻轻触摸膀胱以 排出尿,这样造成尿的表观渗透率增大。
为了改善嗦吗甜的甜味特性,可以将它与其他甜味剂相混合以缩短其甜味持 续时间。或把它应用在那些能够充分发挥这种甜味剂优点的产品(如口香糖), 这样就不需对之加以改性。
Goodman等人提出一种“后向旋转” 二肽酰胺的甜味模型,他们用NMR法 对丙氨酸酰胺(D-型[86]有甜味,L-型没有甜味)及其相应的“后向旋 转”酰胺(R-型[94]有甜味,S-型[95]有甜味)进行研究。假设肽键是 反式的且两性离子天冬氨酰基团的形状近似为一个平面,结合:①偶联常数 [J (VH」H>];②核极化效应;③温度对NH化学位移的影响这三方面的因 素,分析这些化合物的立体构象。通过计算所需的能量最低值,表明只有一种低 能量构象符合NMR的分析结果。图2 -84描绘了带有阿斯巴甜的甜味结合模型, 其中阿斯巴甜的构象与它在晶体结构中存在的构象很接近。阁2 – 84 连有阿斯巴甜分子的甜味结合模助 注:箭头所指的键由品体结构軔箭头方向旋转140%
③4位乙酰基迁移至6位。
图6-24 安赛蜜(原始浓度丨00%)在温度40t (1)和25*€ (2)时. 不同pH下IT:藏时间(月)与保留未分解的百分率的关系
在蔗糖的化学改性以寻求新的甜味衍生物过程中,4,1#,6′-三氣-4, \\ 6、三脱氧半乳蔗糖(4, r, a^tn-chloro-galactosucrose, TGS,简称“三氣廉 糖”)是其中已产业化的一种甜度最大、味觉特性最好的衍生物,英国Tate &? Lyle公司的商品名为Sucrabse (又称“蔗糖素”>。由于其品质优乘,安全可靠, 美国FDA于1998年3月21日批准使用,同时还得到全世界如加拿大、澳大利 亚、俄罗斯和中国等很多国家的批准。

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作者: 中国甜味剂网

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