周村区阿拉伯糖
QHuNHSOjNHjQH,, + NaOH K^H^NHSOjNa + QH,, NH2 +H20
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
热水似乎焙用于提取的较好介质，特别是味觉特性较好的甜菊双糖苷A在 热水中的溶解度要比甜菊莳大。然而，也有几篇专利描述了溶剂提取法的优越 性，这些溶剂包括乙醇、中醇、氣仿、甘油、山梨糖醇或丙二醇等。有时也用氢 化水解淀粉液作为提取溶剂。
1.底物浓度和反应时间对产物的影响
六、利用双酶-化学联合法生产三氯蔗糖
四、利用环糊精葡糖基转移酶改性甜菊苷
(4)软体pAV7-丨中含澜《家抗性标记；栽体pJM3和pJK43b丨中含腐伊霉家抗性鉍记。
第2种合成法最常使用。首先将L-天冬氧酸的氨基团保护起来后转变成酸 酐，再与L -苯丙氨酸甲酯发生缩合反应生成Asp - PheOMe的a -和冷-异构体 混合产物（以《-异构体为主），然后去除保护基，从混合物中分离出a-构体 (阿斯巴甜）并提纯梢制。图2-18所示为该路线的合成过程。L-天冬氨酸的 氨基团保护有很多种，主要有C02CH2C6H5、CH3COCHCCH3, CH;COCH2CO等， 也可在天冬氨酸转变成酸酐的同时使用CH0作为氨基的保护基。图2 - 18是使 用苄氧羰基（C02CH2C6H5)形成保护基的。
(1) 1%嗦叫甜于丨％ -30%乙醉中（2> 1%嗉叫甜于40%乙醉中 (3) 1%嗦叫甜于60%乙醉中（4> 1%嗦吗甜于60%乙醉中（pH=3> (5) 1%嗦吗甜于60%乙醉中（未调pH)
从Fischer■提出的甜二肽分子模型中，可清楚地看出甜味在立体化学上的要 求。然而，等价但更紧密的结构01仍有意义。Goodman和Gilon提出一个相似的 典型例子是L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸（及D-丙氨酸）酯。
