宁洱县甘露醇
② N-Me-Gly。
(一）莫奈林的化学结构
Unilever已成功地生产出嗦吗甜II及嗦吗甜分子的前体化合物，这一杰出成 就是通过多年的努力，应用遗传工程方面的最新知识完成的。有两篇专利文献对 这种生产方法做T相当详细的描述。其中一篇描述的娃利用重组DNA技术把植 物基因的遗传信息引人大肠杆菌{Escherichia coli)细菌寄主细胞内，将“设计 好”的DNA适时移人细菌体内就可生成嗦吗甜蛋白。第?.篇描述的是重组[)NA 分子的结构，它可产出嗦吗甜分子的前体化合物。嗦吗甜D分子的氨基末端有额 外的22个氨基酸，羧基末端也冇额外的6个氨基酸。这种伸长的分子有助于微 生物细胞更易排出蛋白质，因此增加了应用时的经济效益。遗传工程的另一个任 务就是通过基W突变使嗦吗甜分子发生特种变异，以观察其对产品甜度及其他特 性的影响。然而，就H前来说，要把这些实验成果转变成商收化规模生产尚冇不 少困难。另一种适合用来生产嗦吗甜的寄主是酵母或其他无毒性的发酵微生物， 因酵母的食用历史很长，对有关管理部门以及最终消费齐来说吸引力更大些。
由于化学水解缺乏专一性，因此对6-糖苷键的水解需要在特定酶的 作用下才能完成。
通过对嗦吗甜分子的形状与组成氨基酸进行特定的化学改性，可以提髙它的 甜味质苗：。这一研究在学术上很有意义，但在实际应用中意义却不大。Van der Wei研究小组于1981年报逬了许多有关嗦吗甜结构改性的研究悄况，表5 -4概 括了其主要的研究结果。从中可明显看出，即使对嗦吗甜分子只进行了微小的结 构变动，如赖氨酸的乙酸化或天冬氨酸的改性，均会引起分子甜味的期显下降。 当然也得到一些积极的有意义的效果，诸如竣基的酰胺化可使其甜味和味觉持续 时间提高了近6倍。有个未曾预料到的结果是该分子的8个二硫键中即使只有1 个被还原，其甜味也会完全丧失。这或许可以解释过熟TD果实中由于发生了迅 速的降解生成非甜肽与氨基酸，从而引起提取物甜度的下降3
Van der Wei等人的研究表明，T. danieUii (TD)假种皮的水提取物主要含 有两种蛋白质，称为嗦吗甜I (T丨）和嗦吗甜II (T_)。Higginbotham等人对 TD所含其他次甜的蛋白质做了研究。1979年首次分析出T,的氨基酸顺序， 它是一条含有207个氨基酸的单链，由8个二硫键交联起来。应用凝胶色谱法 测定其相对分子质萤为21000，根据已知氨基酸计算出来的精确相对分子质量 为22209。它的竣基与氨基末端均为丙氨酸，没有异常的氨基酸、侧链取代 基、键合或末端变性等现象。在通常食物常见的氨基酸，只有一种组氨酸是它 所没有的。1982年Edens等人报道了嗦吗甜D氨基酸分析结果，认为嗦吗甜 II蛋白的氨基酸总数目与嗦吗甜I 一样，只是在46、63、67、76和丨丨3等5 个位罝上的氨基酸与嗦吗甜I不同（表5-2)。嗦吗甜n的精氨酸、谷氨酰胺 与天冬氨酸分别比嗦吗甜I多1个，嗦吗甜n的天门冬氨酰比嗦吗甜丨多2 个，嗦吗甜I的丝氨酸比嗦吗甜n多1个（表5-3)。显然，这几种不同的氨 基酸并不是嗦吗甜的主要组成氨基酸，因为嗦吗甜I、嗦吗甜n两种蛋白质的 甜味特性十分相似。两种蛋白的等电点p/也相似，都在丨1.5?12. 5之间，具 体精确的测定尚有困难。根据嗦吗甜n的氨基酸组成可计算出其相对分子质量 为22293,稍大于嗦吗甜丨的数值。
控制下表达得到苯丙氨酸和天冬氨酸的聚合体。该聚合体可以用不同蛋白酶， 如可溶性或固定化胰凝乳蛋白酶、水溶性或固定化枯草杆菌蛋A酶Carlsberg、 可溶性蛋A酶K和可溶性蛋内酶嗜热菌蛋白酶水解得到多肽，但这些酶都不 能专一水解得到Asp-Phe。可溶性枯草杆菌蛋甶酶Carlsberg或蛋白酶K的催 化专?性不强，得到的水解产物为ASp-Phe、Phe-Asp和其他由这些二肽聚 合的低聚物；用固定化枯草杆菌蛋白酶催化得到的结果最好，水解产物中绝大 部分为Asp - Phe。
阁4-7反应时间和加酶毋对甜菊苷 转化效率的影响
当2，4，6-三溴苯甲酰胺的C-3位被羧烷 C1 NHz 基或竣烷氧基取代后，所生成的化合物具有很高图6-29 3- (4-氣氨茴基）
