原州区三氯蔗糖

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原州区三氯蔗糖

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四、利用全基团保护法生产三氯蔗糖
图3-丨3 -氣蔗糖仝基团保护合成法的主要步骤 T. 三苯甲基 AcO——乙醃基
质粒pCLRM216、pRMll、pUMll的转化体,在lOmLYPD培养基中培养后, 均能产生莫奈林。凝胶定虽扫描表明,奐奈林在pUMll转化体中的表达世,超 过可溶蛋白的50%。以141基因为探针对转化体进行DNA印迹分析,测定 pCLKM216的整合拷贝数为10?丨丨,PRM丨丨为12~丨8,pUMll为20?22。经 DNA印迹分析,确走pKMH和pUMll中没有细菌序列。
大多数转化体培养72h时嗦吗甜产率达到最高,72h后产率明显下降(图 5-8)。但双转化体TB2bl-44-GD5的产率在72h后仍继续增加,这是由于它 的gdhA启动子与生长期同步表达,而酯酶B2启动子在生长期结束后表达,因 此当晚表达的启动子(如次级代谢的启动子)也能被Aauwnori转录机制识别 时,将一早一晚表达的启动子结合也许就吋以延长基因的表达时间。TGDTh-4 以硫酸铵为氮源培养48h时嗦吗甜分泌量达到最髙,这是因为它采用的 A. awamori的gdhA启动子通常较早表达。
根据DuBois等人的报道,当蔗糖浓度为8. 5%时,新橙皮二氢查耳酮的相对 甜度大约为663或612,后来又修改为340。最后这个数值与Guadagni等人的试 验结果基本一致。根据Guadagni的数据可知,蔗糖浓度为8. 5%时,D的相对甜 度为196。这两个数据的差别可能是由于品尝小组及品尝方法的不同而引起的。
两代喂养忒验表明,三氣蔗糖没有致畸性或致突变性,也不会影响动物的繁 殖力。对小鼠和猴进行的专门研究表明,三氣蔗糖和其分解产物对神经系统无影 响,对动物血液葡萄糖水平及胰岛素分泌量也无影响。
发酵完成后,为了从去除干物质的培养基上清液中有效地提取出G -6 - a, 人们试验了多种溶剂,包括甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和1 -丙醇等。其中, 甲醇是G-6-a最有效的溶剂,但它同时也会溶解一些葡萄糖,因此要得到纯 净的G-6-a,还必须利用色谱进行进一步分离。以硅胶为固定相,用丙酮对甲 醇提取液进行洗脱可以从中分离出葡萄糖和G -6 - a两个成分并得到纯度为 80% ~85% 的 G-6-a。
(5)色拉调味料。
脱去。表2-S 保护基团及相应条件注:TFA =三氤乙酸.X=说士,a =根#条件可说士或不脱去,b =不发生反应,c =犮生反0 = ?定?2.添加有机助剂法由式(2-6)可知,随者P&增大,PK2减小,平衡常数增大。通常在有机 助溶剂或多羟基醇存在时,溶液的介电常数减小,因此加入助溶剂可增大P&, 由此增大(尺或式(2-6)两边取对数得

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