乡城县罗汉果苷
在我国，有人先后选用了毕赤酵母系统中的分泌型表达载体pPIC 9K及胞内 表达载体PP1C3.5K进行莫奈林表达，结果是，分泌型表达菌株能较高地表达莫 奈林，但没有甜味活性，而胞内表达的英奈林有活性，其产最达到1.8g/L。
然而，在这之后的很多研究人员，包括美国普渡大学R Whistlei?教授，伊利 诺大学N. R. Farnsworth教授和德国A. G. Schering等人均无法重复上述试验结果。 有人还就甜菊苷对雌鼠雌激素及雌免孕激素之类物质的可能影响做一研究，也没 发现任何积极的结果。
Hodge等人在大U形口袋区发现5种糖苷，即甘草甜素、柚背二氢査尔酮、 甜菊苷、新橙皮苷二氢查尔酮和Osladin等。它们含有多个AH、B单元，呈U 形三级结构，U字中部为疏水骨架，如图1-25所示。其抑制剂Gymnema具有 相同的骨架，但其上的6个一OH全被酯化，这表明甜受体也有与此互补的 穴位。甜分子中疏水侧链的长度与甜度有关，侧链的空间要求取决于其结合的 部位，故各甜味化合物的侧链长度限度也可作为研究受体的有利探针。应指 出的是最强刺激是针对脂膜的烃链C~9前段，故有刚性（：9疏水链的化合物 最甜。
酵母（BB25-UO 30*t. 72h
表4-S 葡糖基转移酶处理前后甜叶菊提取物甜味成分的变化单位：质量分数
在双酶-化学联合法中，最值得关注的是优化G-6-a的发酵条件，以及 改善糖和糖酯的分离技术，这将有助于提高该法的效率。因此，脔要对G-6-a 形成过程中的生物化学和生理学机制，进行详细的研究以简化该操作。而快速分 析、良好的反应控制以及适时地终止反应，也是本方法所必需的。如能以蔗糖为 原料经微生物发酵作用直接生成S-6-a，这方法当然非常吸引人，在这方面值 得花大力气加以研究。
甜味强度的尝味评定方法通常可分为三种：摄的估计（megnitude eslima- tion) % 定级方法（ranking procedures)和网值测定法（threshold determination )。 尽管人们对这三种方法的本质区別在理论上还存在着争议，但它们都能得到一致 的再现性好的结果。
对不同内阻下场强对转化率和活细胞的影响作了研究（图5 -18)。细胞悬 浮液与1叫经Bgi fl酶切的pCLRE2混合后在电容25jjlF下进行电脉冲转化，电 脉冲后，细胞在30T添加了 lmol/L山梨糖醇的YPD培养基上培养6h。在场强 为3.75kV/cun和内阻80W1时得到最高的转化率，约为1400个转化体/jxg线性 pCLRE2。在3. 75和5. 0kV/cm和内阻6(X)、800或100011时转化率较高[图 5-18 (1)]0这些条件下细胞存活率为10%?40%，实际脉冲时间为11 ~ 17ms [图5-18 (2)]。当内阻200或400ft时，转化率低。
尽管对三氣蔗糖结晶体X -射线的结构分析表明，在2 - OH和3' - OH之间 会形成一个分子内氢键，其中2-OH是质子受体，3'-OH是质子供体。但在一 个稀释的含水溶液中，分子内部的氢键很可能分裂，断裂开的部分可分别与螺旋 形甜味蛋白质受体中末端氨基酸残基上髙度缺电子的NH/ (AHr,下标i■是 指甜味蛋白受体，下同）和富电子的CONH2 (Br)形成外部氢键。因此，3'- OH/2 -0具备成为三氣蔗糖AH/B对组成的客观条件。
从枯草芽孢杆菌(SAtUis') NCIB 11871中分离得到的一种特异性果糖转移酶， 可以专一地将G-6-a转化为S-6-a,并获得得率较髙的S-6 - a。尽管这种特 异性果糖转移酶可能会受到G - 6 - a上乙酰基的位阻影响，但总的效果仍较为理 想。这种酶和通常所说的果糖基转移酶有关，但又有其特殊性。它不会通过重复地 转移果糖基单元形成果聚糖，而只能专一地将-?个果糖基单元转移到受体己糖单元 上得到二糖产物，这可能是W为该酶的活性中心太小以致不能容纳超过单糖大小的 糖分子受体，也可能是因为果糖基不是这种酶的最佳受体。因此，这种单糖专一性 的果糖转移酶，被定义为单糖专一性的果糖转移酶（EC2.4. 1.162)。
