盘龙区阿力甜

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果素。首先,导入重组奇异果素基因,构建重组奇异果素的表达质粒,并在表达 质粒中插人KEX2切割位点;然后,将表达质粒导人如orrzoe,获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养,培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示, 在非还原条件下,60ku处有一条宽带,301O1处仅有一条校糊的带;而在还原条 件下,60ku处的带消失,30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基,纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基,所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明,这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
在后续的研究中,人们优化了表2-68所示的环丙基酯二肽化合物的“下 面”酯基团。这其中,以正丙基酯的二肽化合物甜度最大,苄基酯的二肽化合 物[丨78]没有甜味,这与对应的成对二甲基化合物[169]甜度为0的情况一 样。有趣的是,iV-丙基-酰胺化合物[179]并不具甜味。
选用三苯中基化和乙酰基化反应,来完全保护蔗糖的8个羟基。具体操作方 法是,在500mL圆底烧瓶中,依次加人20g蔗糖粉(0.058mol)和80mL 二甲基 屮酰胺,磁力搅拌并升温至50?65T使蔗糖完全溶解,再加入24g/V-甲基吗啉 (0.236mol)。分3次在3h内加人56. 8g三苯基氣甲烷(0. 197mol),恒温反应 3.0-4. 5h0
由于Bntzzdn独特的科研和产业应用价值,大蛩生产高纯度的Brazzein成为 产业界的目标。Brazzein在天然植物中含量甚微,提取困难,产最受到限制。因 此利用基因工程,在其他宿主中表达该外源基因是快速冇效的途径。美国Nektar Worldwide公司已将Brazzein表达至玉米中,It转基因玉米中能提取1kg Brazzein。 另也曾尝试在酵母中表达合成Brazzein,但没有成功。这里讨论用大肠杆菌表达 Brazzein 基因。
提取甘草甜素时,先将甘草切细后加5倍质量的冷水浸泡2d后过滤。往滤 渣中加3倍质量的水冷浸12h,再次过滤。合并两次滤液,经蒸发浓缩并冷却 后,加乙醇在低温下放置2d后过滤,滤液蒸发浓缩后得黑褐色黏稠状抽提液。 抽提液中的甘草甜素含量为15%,干燥失重为35%以下。甘草抽提液再次浓缩 干燥后,制得粗结晶,然后在稀乙醇溶液中重结晶制得甘草甜素终产品。
Prekash等利用催化剂还原/V-烷基化反应制备纽甜。将阿斯巴甜与
阿斯巴甜可作为甜味剂和风味增效剂应用于各种食品、饮料或医药品,表 2-10为其应用范围。由于它是一种二肽化合物,进人机体内可被消化吸收,并 提供16. 72kJ/g的能量,因此美国FDA将之列人营养型甜味剂中。
美国FDA进行的研究包括三代繁殖研究和二代长期喂养研究。从F,代小动 物中随机挑选出雄、雌白鼠各48只为试验组,分别喂以0%、0. 01%、0. 1%、 1%、5%或7. 5%的糖精一段时间。试验表明,糖精对动物的血液、体1:或成活 率等没有影响,喂以5%或7. 5%糖精的白鼠体重比控制组的低。最明显的病变 是7. 5%组F,代雄鼠泌尿膀胱的肿瘤病变率明显上升,在F,代雌鼠中发现了两种 明显的肿瘤病变现象,在F,代5.0%组和F,控制组均发现一种肿瘤病变现象。作 者指出,还有一些互不相关的病理研究证实了这个结论。

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