泸州市蔗糖素
构建的pRMll和pUMll中包含细菌质粒序列，因此经Bgl II酶切去除细菌 序列实现线性化后将促进载体在目标部位通过单交换取组（single crossover recombination)进行的整合，分别以质粒pCLRM216和pKMl 1所含的rDNA片段 和质粒pUMl 1所含URA3基因片段作为同源重组整合的目标序列。
投人大工业生产最有效的途径仍是微生物发酵生产。近年来科学家们对真核 基W在原核中表达产物的功能进行了充分研究，认为有些基因产物尽管加工过程 不完善，只要给予合适的体外环境，它们可以重折叠成具备真核基因功能的三维 构象，从而恢复功能活性。因此选择合适的表达载体和摸索合适的体外条件去形 成有完全或部分活性的功能蛋白仍是一项有吸引力的工作。
一般认为，在实用条件下，嗦吗甜的相对甜度为蔗糖的2000 ~ 2500倍，但 它的甜味特性与蔗糖有所不同。它到达最大甜度的时间较长，甜味持续时间也较 长，这是它与蔗糖在甜味特性方面的主要区别。嗦吗甜没冇糖精、甘草甜素、甜 菊苷一类强力甜味剂通常带有的不愉快苦后味、金属或化学后味，也没有新橙皮 苷二氢查耳醐所带有的类似薄荷醇的冷却口感。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
2004 年，Yukako Shirasuka 等从 C. 发现了一种新成分，命名为 Neo
对脱酯化纽甜用伤寒杆菌做Ames检测（不论用或不用代谢活化），或者中 国仓鼠卵巢细胞黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶诱变检测，都没有发现纽甜的致 突变作用。体内和体外遗传毒理试验证实，纽甜和脱酯化纽甜都没有潜在的致突 变性或染色体畸变性。
该生产方法采用邻甲基苯胺先在酸性条件下与亚硝酸钠发生重氮反应，然后 通二氧化硫进行置换，用液氣进行氣化，从而得到邻甲苯磺酰氣，然后与甲苯法 相同，经过胺化、氧化、酸析和中和反应，得到糖精钠。
当要观察嗦吗甜对咖啡香精的阈值是否有影响时，可观察它对真正咖啡 (如速溶咖啡）的影响情况便得到证实。品尝结果表明，使用NSM的咖啡（带 或不带奶味）风味特別浓，而且即使经髙温杀菌处理NSM的作用也不丧失，这 是因为它含有的嗦吗甜增强了产品风味的缘故。但这种制品配料复杂，用在咖啡 制品增香上显得不很经济，这时可使用另一种配料比较简单的Nev San Mark C (NSMC)。风味品尝表明，NSMC能增强咖啡制品的芳香味、苦味、酸味及焙炒 香味，效果随添加量不同而有所差别。NSMC还能维持经过长时间贮藏后产品中 的咖啡风味。
