电白区阿斯巴甜
最近，研究人员还发现了一种NAS的同种异型物一NAS-2。仙茅蛋白2 的cDNA已克隆，其核苷酸序列也被测定。尽管，仙茅蛋白2的推测氨基酸序列 与NAS的相同，研究人员发现两者的核苷酸仍存在一个不同之处。Maiko Suzuki 等尝试了在￡：.co/i中表达重组仙茅蛋白1 (过去被认为是Cimnilin)和仙茅蛋白 2。仙茅蛋白1和仙茅蛋白2分别在E. coli中表达，然后用氧化重折叠方法重新 组合，从而获得仙茅蛋白的二聚体。可是，无论是仙茅蛋白1的同型二聚体 (仙茅蛋白丨-1)还是CurcuUd的同型二聚体（仙茅蛋白2-2),都未能引起 甜味，也未能起味道修饰作用。
(4)乙酰乙跣胺-氟硫酰氟法。
图2-14表明在等电点下，温度与溶解度 之间呈直线关系。在低于阿斯巴甜等电点 情况下形成盐溶液的趋势，有助于改善溶 解速率与溶解程度，这可通过先往系统中 溶解一种食用酸（柠棣酸、苹果酸等），然 后再加入阿斯巴甜，或者同时加人两者而 得以实现。
美国一般根据一项14d的关于阿斯巴甜的消费量的详细调查资料，以及在饮 料中纽甜和阿斯巴甜甜度的比较（保守估计为31倍），来确定纽甜的使用量。 饮料是阿斯巴甜和纽甜所期望的主要使用范畴，而更为安全的一种预测纽甜消费 量的设想是用它来取代膳食中所有的阿斯巴甜。基于这些假设，美国食品与药物 管理局估计所有消费者中，预测纽甜的平均和90%的每日消耗最分别是0. 04和 0. 10mg/kg体重。因各国膳食模式的不同，在澳大利亚和新西兰，纽甜的预测每 日平均消耗萤分别是0. 02和0. 01 mg/kg体重，分别焙可接受每日摄入量的1% 和0.5%，纽甜的95%预测摄入萤分别为0.112和0.05111&^8体觅，相当于可接 受的每日摄人量的5. 6%和2. 5%。
已有人进行甜叶菊S. rebauduma植物的改性育种研究。日本报道了对该植物 进行细胞组织改性后培育出的植株其双糖A苷含最是原来的2. 56倍。在这种植 株中，双糖A苷的含与甜菊苷相等。总之，甜菊双糖A苷以其更优、更好于 甜菊苷的特性而引起人们浓厚的兴趣，不少人正致力于商业化生产技术的研究。
为了改善嗦吗甜的甜味特性，可以将它与其他甜味剂相混合以缩短其甜味持 续时间。或把它应用在那些能够充分发挥这种甜味剂优点的产品（如口香糖）， 这样就不需对之加以改性。
(7)对大鼠和狗的研究表明它对肾上腺没有不良影响。
自然界中潜在的可作为高效甜味剂的天然糖苷除前述4类之外，本节对其余 6类略作介绍。这其中，甘茶甜素本身并不属于糖苷类化合物，但它在植物体内 是以糖苷形式存在，经酶水解糖苷而制得。除此之外，本节最后还顺便介绍一下 存在于天然植物体内的倍半萜烯化合物（HermmdulcifO，其甜度很髙，但不是 糖苻类物质。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
