汶川县罗汉果苷
注：反应I5hc
Van der Wei等人的研究表明，T. danieUii (TD)假种皮的水提取物主要含 有两种蛋白质，称为嗦吗甜I (T丨）和嗦吗甜II (T_)。Higginbotham等人对 TD所含其他次甜的蛋白质做了研究。1979年首次分析出T,的氨基酸顺序， 它是一条含有207个氨基酸的单链，由8个二硫键交联起来。应用凝胶色谱法 测定其相对分子质萤为21000，根据已知氨基酸计算出来的精确相对分子质量 为22209。它的竣基与氨基末端均为丙氨酸，没有异常的氨基酸、侧链取代 基、键合或末端变性等现象。在通常食物常见的氨基酸，只有一种组氨酸是它 所没有的。1982年Edens等人报道了嗦吗甜D氨基酸分析结果，认为嗦吗甜 II蛋白的氨基酸总数目与嗦吗甜I 一样，只是在46、63、67、76和丨丨3等5 个位罝上的氨基酸与嗦吗甜I不同（表5-2)。嗦吗甜n的精氨酸、谷氨酰胺 与天冬氨酸分别比嗦吗甜I多1个，嗦吗甜n的天门冬氨酰比嗦吗甜丨多2 个，嗦吗甜I的丝氨酸比嗦吗甜n多1个（表5-3)。显然，这几种不同的氨 基酸并不是嗦吗甜的主要组成氨基酸，因为嗦吗甜I、嗦吗甜n两种蛋白质的 甜味特性十分相似。两种蛋白的等电点p/也相似，都在丨1.5?12. 5之间，具 体精确的测定尚有困难。根据嗦吗甜n的氨基酸组成可计算出其相对分子质量 为22293,稍大于嗦吗甜丨的数值。
果浆中的仙茅蛋白不能用水抽提，因此经反复水洗可去除大萤水溶性物质, 然后可以用O.5rnol/L NaCI提取，这样就能明显提高仙茅蛋白的纯化倍数。 0.5mOI/LNaCl提取的提取液无色有甜味，然后经硫酸铵分级，再经CM-Sepha- _柱分离，NaCI线性洗脱后主要成分对应一个尖峰，该峰组分有甜味。加硫 酸铵至约饱和度的80%，得到的沉淀在lOrmnol/L磷酸缓冲溶液中溶解，溶液进 行Sepha(丨exG-100柱凝胶过滤纯化。这样从30g果浆（湿取）可以得到5mg纯 仙茅蛋白（表5-19)，得到仙茅蛋白纯度很高，不溶于去离子水，溶于盐溶液 中，等电点7.1。
本研究用二甲基甲酰胺（DMF)和氣化亚砜制备Vilsmeier试剂，此反应为 放热反应。将8.4mLDMF预冷至0T，加入8.5mL氣化亚砜，搅拌反应30min， 温度控制在50弋以下。反应结束后加人lOOmL DMF，将混合液冷却至Ot,在 20T：以下缓慢加入15g6-PAS (Vilsmeiei?试剂：6-PAS =4:1),在0弋下保持 15min0慢慢升温至70T,通人氮气来赶走部分HC1，此温度下维持30min后再 逐渐升温至100?12(rC，恒温反应3~5h,趁热以活性炭脱色，浓缩滤液，冷却 后有晶体析出。待结晶完全后过滤，用无水乙醉重结晶，得到白色针状晶体，为 4，丨\ 6'-三氣-4,丨\ 6、三脱氧-2, 3, 6，3\ V-五乙酸半乳蔗糖醋 (TOSPA)。
,(被占用受体的_
3.生殖和畸形学试验两代繁殖试验中，分别在雄性大鼠和雌性大鼠交配前的10周和4周就给其 饮食中添加纽甜，一直持续到大鼠交配、受孕、哺乳直至第一子代21 d断奶。然 后从第一子代中挑选出仔鼠来进行第二代繁殖，被挑选的第--子代在交配前继续 喂养10周以上添加纽甜的食物，第二子代在整个受孕和哺乳期间也持续接触纽 甜。试验中，消耗大童的纽甜的连续两代动物，并没有产生对其生殖性能、胚胎 发育、出生后发育等不同发育阶段的活动、反射、学习或身体的成熟造成任何 影响。
仙茅蛋A显著的氨基酸序列相似性，可以推测它们的结构也相似，因此可以根 据GNA的三级结构建立仙茅蛋白的结构模型。经建模研究表明，仙茅蛋白和 GNA总体结构非常相近，与GNA—样，仙茅蛋白含三个子域；均由4个卢- 折祛构成，及由4个氨基酸（在GNA中为Gln、Aspx Asn和Tyr)构成的甘露 糖连接点。但由于某些氨基酸的变化引起了立体障碍，仙茅蛋白的甘藤糖连接 点没有作用，不能连接甘露糖。仙茅蛋白和GNA具有高度的序列相似性，可 能是因为它们分类学上的相同性，它们分属的mm/is ( Amaryllidaceae) 和 curculi^o latifolia (Hypoxidaceae)类别，都属于 Asparagales 目。然而，虽然它 们具有高度的序列相似性和潜在的甜味构型的相似性，其生物活性则完全不同。 仙茅蛋白具有甜味和变味性质，它的生理学作用是否用来吸引动物摄取果实以 传播种子（这对种的生存是觅要的）还不确定。GNA是没有甜味和变味性质 的连有甘錤糖的植物凝血素，其生理学作用也还不淸楚，但有明显的迹象表明 该外源凝血索具有保护作用，能防止昆虫的叮咬。将雪花莲的植物凝血素在烟 草植物中表达，结果显示对蚜虫的抗性增强，这表明这两种蛋白的生物功能是 不同的。
相比于蔗糖，甜蜜素的甜味刺激来得较慢，但持续时间较长。通常认为它的 甜度是蔗糖的30倍。这个比值是用稀水溶液通过感官品尝得到的，在实际应用
注：①根据总残留》计算;
甜菊苷?Rebusoside 一~?甜菊双糖A苷??甜菊双糖B苷
