洛江区低聚木糖

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Kondo等人曾尝试构建一 SCM质粒并在C— idilis中生产SCM。他们把 SCM基因插入由产脘假丝酵母(C. utUis)克隆来的GAP基因的启动子和终止子 片段之间。通过这种方式,他们获得了高产虽的SCM,表达水平高于总可溶性 蛋白的50%。他们还尝试克降带S. cerevisiae GAPDH启动子的SCM基因用来生 产SCM。然而,所得的产最水平很低,仅为总可溶性蛋白的5%左右。美国一专 利公开了利用P. pastoris生产SCM的方法。首先将合成的SCM基因克隆于含有 S. cerevisiae a -因子分泌信号和GAPDH启动子的PGAPZa -载体,然后将构建的 质粒转化成P.P^tori5GS115,最后通过菌株对Zcocin的阻抗性,对转化株进行 筛选。观察发现所分泌的.1:组英奈林为一条12kji的带。SDS - PAGE分析表明, 通过该方法可获得约10g/L的SCM。这些SCM经纯化后可引起甜味。
最后将L-天冬氨酸以N-苄氣苯基天冬氨酸或恶唑烷酮的形式与前两步反 应得到的D-丙氨酰胺缩合。苄氧基苯天冬氨酸溶解在多聚甲醛、对甲苯磺 酸和甲苯的混合液中,在lOOt回流lh,然后加人D-丙氨酰胺和三乙基胺在 60T下反应6h,反应结束后,反应液分别用lmol/L的盐酸和水洗,有机相用硫 酸镁干燥,过滤干燥得到阿力甜,产率为85%。
点。以上两种三氣蔗糖衍生物分子结构处于这种构象时,能量最低,分子C -6羟基为反式非对称(gauche-trans),并且己酮糖环上的一级氣取代基为 非对称-非对称(gauche-gauche)构象。如果甜味分子的构象不是局限在 少=75°和屮= 95°,那么得到的两种三氣蔗糖衍生物扭曲角均为少=82. 5。, 少=13.8°。研究表明,果聚糖苷衍生物均比塔格糖苷衍生物稳定,其中扭 曲角为少=82. 5°和屮= 13. 8°的果聚糖苷衍生物稍微比扭曲角处于少=75° 和少= 95°的果聚糖苷衍生物稳定,C-6羟基为反式非对称,氣取代基都为 非对称-非对称构象。
M时间/h
莫奈林娃从D. cumminsii的浆果果肉中提取出的甜味蛋白一般用水法抽提, 抽提液经离心分离、超滤浓缩后用离子交换色谱法提纯楮制,再经超滤脱盐后冷 冻干燥。起初,1kg浆果只能获得100?150mg的莫奈林,现在的提取得率已提 髙至3~5g。大批量处理时,可使用分批吸附法。先将水抽提液与分散在 0.02nu,l/L醋酸铵缓冲液(PH5.0)的吸附剂CM - Sephadex C25淤浆混合,接 着用水反复冲洗淤浆达到纯化的目的,然后用0.02mol/L NaCl溶液将吸附在 Sephadex上的莫奈林洗脱下来,超滤浓缩后冷冻干燥。这样分离得到的莫奈林, 若在离子交換色谱柱上分别用NaCl浓度呈梯度上升的PH7. 6和PH8. 2缓冲液进 行洗脱,还可进一步分级成5种纯组分,依次称为莫奈林I ~V,其中最主要的 是莫奈林IV。
仙茅蛋白的异型二聚体(仙茅蛋白丨-2)不仅能产生甜味,而且在水和柠 檬酸存在的情况下还具有味道修饰性能。因此,研究人员推测,C树oiia中的 甜味蛋白实际上是由这种异型二聚体组成的,并把这种异型二聚体命名为仙茅蛋 白 1 -2 或 Neoculin。
FSte浓度的模型H?算结果和实验结果均非常符合;但蔗糖浓度的模型计算值比实 验值卜降慢,G、F浓度计算值比实验值增加慢,因此根据该模型计算的蔗糖水 解速率比实验值小。这是因为蔗糖水解参数是根据不加人甜菊苷时蔗糖水解的试 验结果估计,而通常反应体系中加人表面活性剂后,糖类如纤维素、木糖的水解 速率会增大。甜菊苷有亲水和亲油基团,其表面活性加快了蔗糖水解速率的增 加,而计算时没有考虑甜菊苷对蔗糖水解常数的影响,因此加入甜菊苷后,图中 模型拟合曲线不能很正确地反映蔗糖的水解情况,见图4 -25。
4-8所示为Marumilon A在水溶液和5%盐溶液的相对甜度,表4-9所示为盐溶 液浓度变化对Marumikm A的影响。往Marumilcm 50中添加甘草甜的好处是在于 混合后两者所带有的不愉快后味均可降至不明显的程度,这样,Marumilon 50就 更接近于蔗糖了。日本将Marumilon A应用于各种食品和饮料特别是含盐食品 中,因为盐味可提高Mammilcm A的甜味,同时盐味本身也因此而明显减弱。纯 甜菊苷与甘草甜的混合物也有类似效果,但性质不及Marumikm 50好,因为前者 包含有甜菊双糖苷A。
首先,制备乙酰乙酰胺磺酸三乙胺盐。将4.85g (0. 050mol)氨基磺

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