子洲县甜菊糖

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子洲县甜菊糖

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大多数转化体培养72h时嗦吗甜产率达到最高,72h后产率明显下降(图 5-8)。但双转化体TB2bl-44-GD5的产率在72h后仍继续增加,这是由于它 的gdhA启动子与生长期同步表达,而酯酶B2启动子在生长期结束后表达,因 此当晚表达的启动子(如次级代谢的启动子)也能被Aauwnori转录机制识别 时,将一早一晚表达的启动子结合也许就吋以延长基因的表达时间。TGDTh-4 以硫酸铵为氮源培养48h时嗦吗甜分泌量达到最髙,这是因为它采用的 A. awamori的gdhA启动子通常较早表达。
Osladin 是 1971 年由 Herout 等人从水龙母科(Polypodiaceae)植物 Polypodi- am vulgare L提取出的一种皂角苷,甜度为蔗糖的3000倍。与Osladin结构相似 的 Polypodosides A 和 B,则是从水龙骨科植物 Polypodium glycynhiza D. C. Eaton 的根状茎中分离出的。这种植物产于北美洲,俗称“甘草蕨” (Ucorice fem)。 Polypodosides A楚P. glycynhiza的主要甜味成分,在糖苷配基C - 3位上连接1 个新橙皮糖(2-0-a-S-P比喃鼠李糖基-芦-S-n比喃木糖)单元。Polypodosides A的糖苷配基与OsUdin糖苷配基的厶〃-衍生物相?致。
醇羟基可以被多种氣代试剂氣化,如 盐酸/氣化锌、亚硫酰氣、三氣化磷等。就 反应机理而言,均按Sw亲核取代反应历程 来进行,被取代的3个羟基中,因&和r 位碳原子属于伯碳原子,可0由旋转,不存在构型转化现象,而4位上的手性碳构 型发生Walden翻转,使原来的葡萄糖构型转换为半乳糖构型,如阁3-21所示。
图1 - 32 Brazzein和嗦吗甜与受体活性形态——Aoc - AB的对接的比较 (1)通过对接计算而得的两个Aoc - AB和15个Braacin分子结合的观察阳 (淡绿色部分为T1R2,深绿色郎分为T1R3, 部分为Braoein分子)
4.对甜味分子空间结构要求的设想由于甜味感觉对底物的要求可以是小如CHC13分子,到大如多肽和大分子蛋 白质,因此可以认为,甜味化合物和甜味蛋白受体之间最初的相互作用,发生在 受体表面部分。对于那些与受体之间无疏水接触的甜味剂分子,由于这种表面吸 附之间的作用力相对较低,故其甜度也低,这也许就是糖和糖醉均不是很甜的原 因。对于那些与受体之间有一处或多处疏水键合的甜味剂分子,除了在AH、B 基闭上的两点接触外,更包含有空间上的疏水键合,这种更深层次的键合则很可 能发生在甜味蛋白受体中类似酶活性位点的“嵴”或“裂缝”中。
选择以滴入的方式往环化剂溶液中添加三氧化硫溶液;三氧化硫为氨蓰磺酸物 质的量的5倍,环化反应温度控制在-25?30%之间,环化时间选用0.5h;水解反应 温度为-丨5尤,水解时间为丨.5h。选用上述优化条件,安赛蜜收率可达81.6%。
图丨-33所示为MNEI和Brazzein的内部(与受体接触的部分)和外部(暴 露与溶剂的部分)的比较。MNE丨和Brazzein的等电点分别是9.0和6. 7。如图 1 -33所示,Brazzdn的负静电势大部分集中在其外部表面
已知TCK只有在亲水的溶剂中才能高度溶解,但在保证酶解反应能得到 必要的水的前提下,a-半乳糖苷酶却被证明在与水不互溶的有机溶剂中, 最稳定并具有最高的活力。这个矛盾,可以通过使用被含水缓冲液预饱和的 有机溶液时得以解决。研究发现,高水混溶的溶剂如二氣六环、丙酮、甲醇 和四氢呋喃等,即使使用高达30%的含水缓冲液进行预饱和,也不支持 a-半乳糖苷酶的水解反应。但在含水缓冲液预饱和的正丁醉、甲基异丁基 酮和乙酸乙酯三种溶液中,TCR的溶解度均达到50%以上。这些溶剂同时 也支持a-半乳糖苷酶的活力,只是三者对三氣蔗糖的溶解性存在很大的差 別,如表3-9所示。

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