武侯区二氢查耳酮
表5-9 各转化体中嗦吗甜表达盒拷贝数（以切咖单拷贝gdhA基因为对照}
Candida utilis有多佶染色体(多于二倍染色体）但没冇性生活周期（sexual life cycle) , W而无法得到营养缺陷型突变株作为转化的宿主细胞。因此开发核 糖体^41蛋白的突变基因作为选择标记基因。
五、纽甜的安全毒理学分析
关于甜叶菊甜味成分的研究，1908年就有Reseneclc等人的报道。1931年 Lavielle从甜叶菊中分离出甜菊苷，分析它是由1分子甜味菊醇和3分子葡萄糖 组成的糖苷。后来，经众多研究确立了甜菊苷的分子式。日本还最早分离出甜菊 叶子中的其他几种成分，包括甜菊双糖A苷、B苷、C苷、D苷和E苷等。1985 年Kinghoron等人的分析认为，甜菊叶子中含有双萜、三萜、固醉、类黄酮、单 宁及挥发性油等31种成分。日本甜叶菊公司认为，挥发性芳香油、单宁和类黄 酮等是构成甜叶菊提取物不良风味的主要成分，称为“甜味质萤影响因子”。也 有人认为，甜叶菊的苦味是由于倍半萜内酯引起的。
1.生甜团的分子识别早先在考虑Kier-Shallenbei?模型的尺寸范围和蔗糖的分子结构后，人们认 为蔗糖分子内有两种可能的三角形生甜团系统：即厂-OH (AH)、2-0 (B)、 4-H (X)和 3,-OH (AH)、2-0 (B)、4-H (X),它们均是以顺时针方向排列的。怛这种安排 只能证明丨? - OH/2 - 0和3# - 0H/2 - 0在充当蔗 糖生甜闭中AH、B基本单元上的正确性，却不能 说明为什么蔗糖C-l'、C-4'、C-6,位上的羟基 被氣原子取代后均能使甜度显著增加。
(1) Temussi等人推算的模s [与轮廓匹配的分子为一种大的W性甜味化 合钧一3-苯氨基-2-笨乙烯基-311-萘并（I, 2-d)咪唑基-5-磺酸（2) Goodman等人提出的模型（AH - B系统位于轴，X疏水基团X W可以占据空间的几个区域）(3)与Phe的f-族转异构体对应的、处1?伸展构象的阿斯巴甜分子模型(4)与Phc的g-旋转异构体对应的、处于折黉构象的阿斯巴甜分子模沏
0-2之间的分子内氢键。种种迹象表明，它在水溶液中存在着丨个或多个这类 氢键，这对三氣蔗糖在酸性水溶液中特別稳定的性质起者很大的作用。
Ariyoshi等人提出-种不需保护天冬氨酸氨基团而直接合成阿斯巴甜的方 法。他们将L-天冬氨酸酐盐酸化物与4nu)l L-苯丙氨酸甲酯在氣乙烯之类有 机溶剂中发生缩合反应生成《-和芦-型Asp-PheOMe混合物。如前所述，这 种不带保护基的合成反应一般会出现很多副反应。但Ariyoshi等人通过优化反 应条件来克服这种闲难，成功地实现了无保护基合成反应，反应产宇达到 37%左右。这个研究还表明，通过溶解于稀盐酸溶液，是很容易将a-Asp- PheOMe从泠-异构体及其他副产物中分离出，且a - Asp - PheOMe ? HC1易于 结晶析出。
在过去的30年中，美囯农业部西部地K研究室对新橙皮苷二氢杳耳酮 (n )进行了广泛细致的毐理研究，包括使用180kg甜味剂样品长达2年的慢性 毒理试验。Gum丨rniann对这些试验结果做了报道。
图4 -11所示为在非均匀酶反应体系中，环糊精葡糖基转移酶为100 ~ 1500U/g
