兴宾区罗汉果苷
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
二氢查耳酮作为甜味剂可应用于食品、饮料、糖果和医药品中。它们持久的 甜味和恒定的性质使之特别适合应用于口香槻、糖果、牙裔和漱【:丨剂之类产品。 由于新橙皮二氢査耳酮甜度大，使用时必须添加些糖醉之类填充剂，故必须注意 各种组分配料的风味配合问题。有些专利描述了二氢查耳酮与蔗糖、非糖类甜味 剂、葡萄糖酸内酯或香草醛混合使用有很多优点。
嗦吗甜的风味增强特性是1975年间偶尔发现的，当时有关人员品尝以薄荷为 基本风味用嗦吗甜增甜的饮料时，发现即使甜味消失之后口感的薄荷冷爽感仍然维 持着。后续的专门研究发现，如果往原來刚好能感觉到薄荷味的稀溶液中添加 O.Sw/mL的嗦吗甜后，该溶液即使神稀释10倍也仍有薄荷感。表5-5列出它对其 他类塱风味的增效作用部分结果。从表中可以看出，它对薄荷油的增效最为明显。
三氣庶糖结晶产品的稳定性，足够满足它的贮藏运输及应用于干燥混合粉中 的要求。在冷藏干燥条件下，对三氣蔗糖没有任何操作上的困难，如在20T干 燥条件下虻藏4年也很稳定。当然，干制品的稳定性随温度和时间而定，在较髙 温度下存放时间会缩短。如在35T时的货架寿命为丨2周，但在70弋时仅为12h。 在很高的温度下，三氣蔗糖的第-个变化是色泽变深，因此贮藏时控制温度是延 长存放时间唯一重要的方法。
(一）奇异果素的提取
2.受体蛋白识别部位人体甜味受体蛋白存在八个基本的识别部位，分别为B、AH、XH、G,、 G2、G3、04和0，识别部位由15个基本识别点组成，分别为B,、B2、AH,、 AH2、XH,、XH2、G,、E,、G2、Ej、g3、e3、g4、e4x d。
图3 - 22 Vilsraeier试剂的氣化机理
由实验数据得知，在奇异果素二聚体中，His29比His59更外露于分子外。 这一结果暗示，HiCQ有可能在奇异果素的味道修饰作用中扮演主要角色。因 此，他们研究了组氨酸残基周围的带电区域，这些K域有可能适合于与甜味受 体结合并产生味道修饰作用。尤其值得注意的是，许多带电残基（Arg27、 Asp28、Arg54、Glu56、Asp 166 N Argl71、Argl72、Aspl77、Lysl78 和 Glu 183)都在His29附近。这些观察结果将为证明T1R2 -T1 R3受体的带负电 荷空穴和蛋白的正电荷K域之间的静电相互作用提供了一个很好的依据。对 His59做类似的分析时，他们也发现了一个比较小的带电K域（Arg54、Lys55、 Glu56、Asp58、Asp60、Arg61和LyS186)在奇异果素二聚体中，撕基位于蛋 白的边缘，属于外餌区域，糖基与蛋白质主体之间也没有形成重要的相互作 用。与另外一种糖蛋白——Neoculin相似的是，奇异果素的糖基部分并不参与 味道修饰作用。
