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质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
Oshimn等人在混合液中，用平均尺寸3.4JJLIT1 x9.5m.iti的固体嗜热菌蛋白酶 催化合成Z-A.sP-PheOMe。该混合液组成为乙酸乙酯、苯、甲醉和水，其比例 为50:29:19:2。该方法的主要优点是由于单位体积的酶更多，因而反应器容积 比固定化酶反应系统的小；并由于只有在固体表面的酶分子起作用，因此粒子内 扩散对反应速率的影响可忽略不计。但也存在一个缺点，W为所用固体酶的体积 很小，因此连续反应时，压差很大。
投人大工业生产最有效的途径仍是微生物发酵生产。近年来科学家们对真核 基W在原核中表达产物的功能进行了充分研究，认为有些基因产物尽管加工过程 不完善，只要给予合适的体外环境，它们可以重折叠成具备真核基因功能的三维 构象，从而恢复功能活性。因此选择合适的表达载体和摸索合适的体外条件去形 成有完全或部分活性的功能蛋白仍是一项有吸引力的工作。
图3 - 22 Vilsraeier试剂的氣化机理
通过研究发现核糖体L41蛋白中的第56位氨基酸决定了酵母对CYH的敏感 性或抗性。56位氨基酸为谷氨酰胺时该蛋白为抗性蛋白，56位氨基酸是脯氨酸 时为敏感型蛋由。这也在CYH抗性酵母Candida mallosa、Kluyveromyces lactis和 Schwanninomyces cerevisiae 的 L41 蛋白得到了证实。对于 CYH 敏感型 Saccharomy- ces cerevisiae^将其L41蛋白第56位氨基酸的密码子用谷氨酰胺的密码子替换后， 细胞就具冇了 CYH抗性。
三氣蔗糖在20弋、0. 1%水溶液中的表面张力仅为71.8mN/m，由于对水的 张力很小故几乎可以忽略不计。假如碳酸饮料中的表面张力大，会引起很多泡 沫，三氣蔗糖表面张力小，可以很好地应用于碳酸饮料的制造上，且适合于高速 瓶装和罐装生产线。
将这种浆果命名为“奇异果”（Miracle fruit)是非常恰当的。虽然它自身并 没有什么特別的味觉，但可将任何食品或饮料中的酸味转变成明显的甜味。而 且，这种甜味还可持续很长时间，对于某些敏感者甚至可持续数小时。它还可改 变产品整体的风味特性，例如将醋风味转变成葡萄酒风味，将酸柠橡汁风味转变 成带来甜味的柠檬汁风味。从奇异果中提取出的具有改良味觉功能的活性物质， 即奇异果素（Miraculin),从化学结构上看是一种糖蛋白。
每个参数前的系数表明，二肽化合物分子的甜度随分子疏水性和体积的增大而增 加，怛随分子垂直于轴距离的增大而减小。 .
