武定县爱德万甜
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
同源建模及对接研究有力地证明了，受体上有两个结合小甜味分子的活性位 点和一个结合甜味蛋白的活性位点。由于甜味化合物的复杂性和多样性，很自然 地，人们会怀疑是否有另外的结合部位存在。确实，在最近的几年里，许多分子 生物学实验，都有助于解释甜味受体和不同配体的相互作用，并为多结合位点的 观点提供有力证据。到目前为止，发现的可能的另外部位主要有两种：一种焙结 合甜赉素和丨actisole (—种甜味抑制剂）的部位，另外一种是结合其他甜味蛋白 的部位。
货架寿命；在中性介质中或瞬时髙温杀菌条件下，纽甜的稳定性大大超过阿斯 巴甜，因此可作为焙烤食品的甜味剂。纽甜还可与还原糖及醛基风味物质共 同使用而不会发生不良反应，它的安全性也比阿斯巴甜有了较大的提髙。由 于纽甜的甜度高，等甜度成本要比阿斯巴甜低。W此，纽甜具有巨大的市场 潜力。表2-21 阿斯巴甜和纽甜的比较续表注：? MRS 10% ：达到与丨0%戾糖涫液相等鉗度所要求的溶解度的倍教
通过比较发现，仙茅蛋白和其他6种甜蛋白和变味蛋白间的序列或结构没 有相似性，但它和雪花莲的植物凝血素（GNA)的41%完全一致，65%同源 (homology) 0 GNA是连接有甘露糖的植物凝血素。Hestei?等认为基于GNA和
R.C00H + NH2Rj—R,C0NHR2 + H20 (2-2)在缩合反应中，由于未反应的氨基和竣基的电离，使得反应主要朝起始物方 向移动，因而平衡得率一般都很低。当产物肽在水溶液中不发生沉淀时，将胺和 竣酸的电离考虑在内，表观平衡常数可由下式计算：
反应体系中的葡萄糖副产物，以及约有超过40%未发生反应的G-6-a,可 以通过回收而敢新利用，吸附在DEAE-纤维素柱上的果糖转移酶，也可以通过 用O.5mol/L磷酸盐缓冲液洗脱而实现循环使用。但在反应过程中，利用树脂将
其中，嗜热菌蛋白酶的吸附影响可以忽略不计；因为合成速度比底物和产物 的扩散速度慢，所以界面的物质传递影响也可忽略不计；水相pH变化可由底物 产物分配比及在电中性时的解离平衡常数计算得到。
三、嗦吗甜的甜味特性
在C-6’位上的进一步氣化能提高甜度，制得的4，6^-三氣-4，1'，
