闽清县果葡糖浆
从图4-7可以看出，虽然加酶量不同，但反应一段时间后，转化反应趋向 平缓。增大酶量可加速达到转化平衡，但不能改变这种平衡；对各底物转化速率 比较发现，甜菊苷（S)的转化速率较快，其他糖苷转化速率较慢，只有在S基 本转化完成时才发生显著转化。因此当酶谊较少（<800U/g甜菊苷）时，在所 用反应时间内，转化未达到平衡，S的转化起主导作用。从转化底物来源看，当 加酶量较少时，主要为甜菊苷（S)进行转化，其他组分的转化萤较少。当酶届： 增加时，S的转化量增加较少，而其他组分的转化较显著。减少一半加酶虽同时 延长一倍反应时间的转化结果不如短时间但高加酶虽的结果，这可能是由于糖转 化过程中存在抑制作用。
基间二硫键是Neoculin异型二聚体相互连接的歌要条件。这样的结构特征使 Neoculin的结构有更大的可变性，并有助于Neoculin在实现构象剧烈变化的同时 保持其二聚体结构。综合观察结果——Neoculin溶解于纯水（pH 7.0)也能产生 轻微的甜味，研究人员推测，Neoculin的结构是处于开和合的动力平衡状态中 的，中性环境和酸性环境均会破坏Neoculin的这种平衡状态，使结构分别转向闭 合和打开的状态。但只有当分子处于打开状态，才可产生强烈的甜味作用。研究 人员还构建了 Neoculin与甜味受体——T1R2-T1R3的对接模型，并根据研究结 果猜测酸的介入会打破Neoculin的平衡状态而转向开的状态，从而发生配体-受 体相互作用。
注：?系从天然物中提取出的紫杉叶素（TaxIfoirO鼠乍糖作衍生物。
在二相体系合成Z - Asp - PheOMe的反应平衡的理论关系可按照Martinelc和 Semeno提出的类似方法推导。在推导过程假定在有机相中的底物和缩合产物都 是非离子形态，且在有机相中Z-Asp-PheOMe、PheOMe之间不形成复合物， 带离子型羧酸侧链和非离子型C端的Z - Asp组分忽略不计。二相体系的反应平 衡常数计算式如F:
三、甜蜜素的安全毒理学分析
从植物中分离得到的Brazzein有几种结构，其中主要构型中的末端氨基酸 是焦谷氨酸（pGlu)[围5-24 (1)]0另一构型除末端没有该氨基酸外，其 余均相同，称为de8-pGlul -Brazzein [图5-24 (2)]t它的甜度是主要构型 的Brazzein的2依。按des - pGlul - Brazzein的氣基酸序列采用大肠杆菌优选 密码子合成的基因如图5-24 (3)所示。合成的Bra^ein基因若直接克隆至 质粒 pET-3a、pET-9a、pET - 1 la 和 pET - 16b 得到的 Brazzein 表达水平均 很低，只有pET-3a和pET-9a得到少量可溶的Brazzein。pET载体通常能使 外源可溶性蛋白如葡萄球菌核酸酶表达，葡萄球菌核酸酶与Brazzein的显著不 同是葡萄球菌核酸酶的氨基酸数目>100，且没有半胱氨酸或半胱氨酸含S很 低。若采用两种基因融合生产目的蛋白融合体的表达水平较髙，因此将 Brazzein合成基因插人葡萄球菌核酸酶表达系统。该策略经大肠杆菌生产鸟类 卵黏蛋白区证实很成功。
果素。首先，导入重组奇异果素基因，构建重组奇异果素的表达质粒，并在表达 质粒中插人KEX2切割位点；然后，将表达质粒导人如orrzoe，获得30 个产重组奇异果素的转化株。选择产量最高的菌株进行大规模培养，培养时间为 3d。Western印迹分析确定了培养基表面有重组奇异果岽的存在。结果还显示， 在非还原条件下，60ku处有一条宽带，301O1处仅有一条校糊的带；而在还原条 件下，60ku处的带消失，30ku处的带却变宽。这些结果与两个30ku单体在非还 原条件下形成60ku的二聚体的事实相符。重组奇异果素的产量估计为2mg/L培 养基，纯化重组奇异果素的产S娃0.8mg/L培养基，所得的单体重组奇异果素 和二聚体重组奇异果素的分子要比天然奇异果素的大。对N42、186Q突变体的 N端糖基化位点的分析结果清楚地表明，这是由于所得糖蛋白的糖链部分质里有 所不同而造成的。
慢性试验测得小鼠的最大无作用量是550mg/kg,这相当于人体可能摄取量 的130倍。
立体选择性催化氢解纽甜酯的脂肪酶和酯酶可以分别通过黑曲锥(Aspergillus niger)、米曲霉(AspergUlus oryzae)、南极洲假丝酵母（Candida anlarctica)、 柱状假丝酵母(Candida cylindracea)、产朊假丝酵母(Candida utiiis)、娄地靑祗 (Penicillium roqueforti) x 洋葱假第胞菌(Pscudomonas ccpacia)、少根根箱(Rhi- zopus arrhizm )、水生嗜热杆菌（Thermus aquaticus )、小麦胚芽、假单胞菌 (Pseudomonas sp. )、B 型假单胞傲(Pseudomonas sp. type B)、芽抱杆菌(Bacil- lus sp. ) x咕热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)、猪肝、马肝、兔肝以 及酿酒酵母(Saccfmwmyces ce—、等获得。一般脂肪酶首选B型假单胞菌 (Pseudomonas sp. type B)，醋酶首选从猪肝提取（表2 - 26) 0
