双清区阿斯巴甜

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Unilever已成功地生产出嗦吗甜II及嗦吗甜分子的前体化合物,这一杰出成 就是通过多年的努力,应用遗传工程方面的最新知识完成的。有两篇专利文献对 这种生产方法做T相当详细的描述。其中一篇描述的娃利用重组DNA技术把植 物基因的遗传信息引人大肠杆菌{Escherichia coli)细菌寄主细胞内,将“设计 好”的DNA适时移人细菌体内就可生成嗦吗甜蛋白。第?.篇描述的是重组[)NA 分子的结构,它可产出嗦吗甜分子的前体化合物。嗦吗甜D分子的氨基末端有额 外的22个氨基酸,羧基末端也冇额外的6个氨基酸。这种伸长的分子有助于微 生物细胞更易排出蛋白质,因此增加了应用时的经济效益。遗传工程的另一个任 务就是通过基W突变使嗦吗甜分子发生特种变异,以观察其对产品甜度及其他特 性的影响。然而,就H前来说,要把这些实验成果转变成商收化规模生产尚冇不 少困难。另一种适合用来生产嗦吗甜的寄主是酵母或其他无毒性的发酵微生物, 因酵母的食用历史很长,对有关管理部门以及最终消费齐来说吸引力更大些。
不同的Candida utilis菌株电脉冲转化的效率有较大不同。将Bgl D酶切后的 PCLRE2通过电穿孔转化至ATCC9256和ATCC9226,都能得到CYH抗性菌落, 多拷贝载体DNA也串联整合至rDNA区,但转化率都不到ATCC9950的10%。 整合至ATCC9256的pCLRE2拷贝数为6~8,整合至ATCC9226的拷贝数为 5-9,整合至ATCC9950的拷贝数为10?12。
使用产物沉淀法,当L - PheOMe过贵时在水溶液反应也能有很髙的得率, 其中Z - L - Asp - L - PheOMe与L - PheOMe形成不溶性沉淀。各取底物 2?10mL水中混合,并加人10mg嗜热菌蛋ft酶,起始pH6~8,在 概保持3 ~5h可得到Z-L-Asp-L-PheOMe ? L - PheOMe白色沉淀,该沉淀 得率大于95%。研究还发现,以外消旋化合物为反应底物时,只有L-PheOMe 参与缩合反应得到产物为Z-L-Asp-L-PheOMe,但D - PheOMe也能与Z-L- Asp-L-PheOMe形成沉淀。根据这些研究结果,Tosoh公司开发了生产工艺流程 (图2-20),并在1984年完成了中试。
重组Neoculin的N端被糖基化了,它与植物中的Neoculin十分相似。尽管 重组Neoculin的N端附着有三乙酸基氨,但它和植物Neoculin —样具有甜味和 很强的甜味诱导作用。
反应在溶剂轻油中进行。反应后经结晶和重结晶精制得产品,母液套用。曰 本吉富制药株式会社采用此法。操作简单,原料廉价易得,溶剂易于回收,收率 高;缺点是反应时间较长,反应物黏度增加。
(四)构象受限的同型物阿斯巴甜分子的柔性很大,拥有许多可能的构象。图2 - 74的Ariyoshi甜二 肽模型仅提出了阿斯巴甜分子对大小和立体化学的要求,但没说明对构象的具体 要求,因此比较粗糙,那些能在最佳空间位罝上连接必需功能团的刚性二肽,可 以很好地与甜受体发生作用,因此甜度大。
难度小。本研究采用CH3OH/CH3ONa催化的醇解反应来脱除TGSPA上的5个乙 酿基,将TGSPA溶液用CH3OH/CH3ONa调节pH9,在室温下搅拌数小时,分别 于反应第3、4、5、6小时测定溶液中三氣蔗糖的转化率。如图3-32所示,在 CH3OH/CH3ONa催化的醇解反应中,TGSPA在pH9下反应4. 5h后,反应即已 基本完成,此时转化率约为91%。
三、嗦吗甜的甜味特性
(二)结合小分子甜味剂的活性位点
②蔗糖C-2位上平伏的a-羟基是甜味所必需的,因为6,1、6,-三氣- 6,丨\ 6,-三脱氧蔗糖的甜度是蔗糖的100倍,而其C-2位上的羟基被氣取代 并经构型转化后生成的2,6,丨\ 6'-四氣-2,6,丨、6^-四脱氧甘露蔗糖却 像喹啉一样苦。

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