松潘县果葡糖浆

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松潘县果葡糖浆

松潘县果葡糖浆
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3'区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
1.葡萄糖浓度对发酵过程的影响
三、奇异果素的作用机理
①氟李糖基和葡萄糖基部分以椅式构象存在;②所有的芳族环呈平面状态,没有穹曲或扭曲;③糖苷釔基总体呈线型形状,虽有一定程度的曲折;④该化合物以两种互不相关的A、B构象存在,A、b之间的异香草醛基环 (iso - vanillyl ring)呈 90。的旋转关系。
的D对映体也已被合成,但其粉末不具甜味^
醇羟基可以被多种氣代试剂氣化,如 盐酸/氣化锌、亚硫酰氣、三氣化磷等。就 反应机理而言,均按Sw亲核取代反应历程 来进行,被取代的3个羟基中,因&和r 位碳原子属于伯碳原子,可0由旋转,不存在构型转化现象,而4位上的手性碳构 型发生Walden翻转,使原来的葡萄糖构型转换为半乳糖构型,如阁3-21所示。
这是英国Tate & Lyle公司提出的新方法,首先利用芽孢杆菌属的菌株在 30T下发酵Glc,生成葡萄糖G-6-a (葡萄糖-6-乙酰酯),采用甲醉抽提及 硅胶柱层析分离相结合的方法提纯。然后G-6-a与蔗糖的混合物,在由枯草 杆菌产生的分-果糖基转移酶的作用下,生成S-6-a,采用层析分离的方法可 分离出70%纯度的S-6-a。将之与Vilsmeier试剂反应对4、1\ 6,三个羟基进 行选择性氣化后,再经脱乙酸基反应即得到终产物三氣蔗糖。
在上述试验中,单酯化和氣化反应中分别采用吡啶和DMF为溶剂,假 如这两步反应都使用DMF,便可合并两步反应于一步进行,这样就可简化制 备路线。以DMF代替吡啶作为单酯化反应的惰性溶剂,与吡啶作单酯化反 应溶剂进行比较,结果发现,无论以吡啶或是DMF作酯化试剂,其终产品 得率相当。
6)自洛乳酿小球菌(Micrococcus caseolyticus)的阿斯巴甜水解购能在与 水混溶的冇机溶剂中将不带保护基的L-天冬氨酸与苯丙氨酸甲酯缩合生产阿斯 巴甜。
将无水甲苯逐渐加人装有氣磺酸的氣磺化锅中,低温反应,加完后反应3h, 反应完毕,冷却,使氣磺酸完全分解,放出酸液,然后将所得的磺酰氣油状物进行 水洗,于-20?-15T冷冻12h,滤出对位异构体结晶,液体即为邻甲苯磺酰氣。 在氨化锅内预先放入氨水,加人邻甲苯磺酰氣,在60弋反应2h,冷却,过滤,滤 饼经活性炭脱色,在精制锅中分别用盐酸和氢氡化钠溶液精制,得邻甲苯磺酰胺。

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