伍家岗区蔗糖素

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伍家岗区蔗糖素

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2.非均匀酶催化反应体系的产物分离
Assadi - Porter等应用基因突变技术探索 Bragin甜味功能位点,发现蛋白的两个结 构K域对甜味活性至关重要:一是蛋白N端 和C端相互紧靠的区域,二是43位精氨酸 附近的可变环区。
合成时,.首先将L -天冬氨酸与甲基乙基磺酸酯在45 下于NaOH-CH3OH介质中反应生成硫碳氨基甲酸乙酯,后者于25*C下与PBr3反应得 到稳定的衍生物L - Asp - NTA晶体,得率高达90%。将L - Asp - NTA与 L - PheOMe ? HC1在特定的pH与温度下缩合生成纯净的a - Asp - PheOMe (阿斯 巴甜),得率63%。这种缩合反应只生成构体-?种产物,具冇很大的优越性。
④双酶-化学联合法(单基团保护法);
本研究用二甲基甲酰胺(DMF)和氣化亚砜制备Vilsmeier试剂,此反应为 放热反应。将8.4mLDMF预冷至0T,加入8.5mL氣化亚砜,搅拌反应30min, 温度控制在50弋以下。反应结束后加人lOOmL DMF,将混合液冷却至Ot,在 20T:以下缓慢加入15g6-PAS (Vilsmeiei?试剂:6-PAS =4:1),在0弋下保持 15min0慢慢升温至70T,通人氮气来赶走部分HC1,此温度下维持30min后再 逐渐升温至100?12(rC,恒温反应3~5h,趁热以活性炭脱色,浓缩滤液,冷却 后有晶体析出。待结晶完全后过滤,用无水乙醉重结晶,得到白色针状晶体,为 4,丨\ 6'-三氣-4,丨\ 6、三脱氧-2, 3, 6,3\ V-五乙酸半乳蔗糖醋 (TOSPA)。
①价格便宜。
控制下表达得到苯丙氨酸和天冬氨酸的聚合体。该聚合体可以用不同蛋白酶, 如可溶性或固定化胰凝乳蛋白酶、水溶性或固定化枯草杆菌蛋A酶Carlsberg、 可溶性蛋A酶K和可溶性蛋内酶嗜热菌蛋白酶水解得到多肽,但这些酶都不 能专一水解得到Asp-Phe。可溶性枯草杆菌蛋甶酶Carlsberg或蛋白酶K的催 化专?性不强,得到的水解产物为ASp-Phe、Phe-Asp和其他由这些二肽聚 合的低聚物;用固定化枯草杆菌蛋白酶催化得到的结果最好,水解产物中绝大 部分为Asp - Phe。
的 des - pGlul - Brazzein 和 SNase - des - pGlul - Brazzein 融合体都没有甜味。但 有趣的是,Brazzein 抗体对 SNase - des - pGIu 1 - Brazzein 融合体和 des - pGlul - Brazzein (由CNBi■解离得到)都有反应活性。
(-)蔗糖8个羟基团的完全保护

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