西区水苏糖

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(四)反应惰性溶剂的选择
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸(甲硫氨酸)[图5-24 (2)], 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸,经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化,因此用快速定点突变将核酸酶基因(SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸(正亮氨酸)对核酸酶活性没有影 响,SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点,这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因(SW基 因)插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间,得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生,蛋白质在lac启动子的控制下生产。
不同来源的半乳糖苷酶催化得到的转糖苷产物见表4 -23。其中K. laclis 的芦-半乳糖苷酶不对RU进行转半乳糖苷反应。环状芽孢杆菌的-半乳糖苷 酶在反应初始阶段优先将半乳糖基转移至RU的19 -羧基相连的葡糖基上,得到 以芦-1,4糖苷键连接的RGal - la,然后得到RGal - lb。RGal - la是CGTase 转糖苷的良好受体,因为其19-羧基相连的葡糖基上的C4-0H已用半乳糖基 保护。而大肠杆菌的卢-半乳糖苷酶主要将半乳糖基转移至19-羧基相连的葡糖 基上,得到以尽-丨,6糖苷键相连的RGal-2,该产物不适于用作CGTase催化 转糖苷反应的糖基受体,因糖基会优先与13-0H相连的葡糖基连接。米曲裤 {As. oryzae)和P. 的芦-半乳糖苷酶催化得到RGa丨-1、RGal - 2、
第一节三氯蔗糖
②蔗糖C-2位上平伏的a-羟基是甜味所必需的,因为6,1、6,-三氣- 6,丨\ 6,-三脱氧蔗糖的甜度是蔗糖的100倍,而其C-2位上的羟基被氣取代 并经构型转化后生成的2,6,丨\ 6'-四氣-2,6,丨、6^-四脱氧甘露蔗糖却 像喹啉一样苦。
Akiko Shimizu - Ibuka等综合分子动力学和对接模拟的结果,提出了 Neoculin 甜味产生和味迫修饰作用的机制的猜想,如图5 -29所示。Neoculin的结构是处 于打开和闭合的动态平衡的。当降低pH时候,平衡会转向打开的状态,此时, 只有处于打开构象的那部分才可以与hTlR2 -T1R3受体结合。结合于受体的 Neoculin则会改变受体的构象平衡,使之变为活性形式。因此,Neoculin在酸性 条件下可以产生强烈的甜味,而中性条件下,甜味则十分弱。但是,至于pH的 变化是如何影响受体结构,这点研究人员仍未搞清楚,并且在实验过程也没有考 虑这方面的影响。
表s -7 四种嗦吗甜氨基酸序列差别比较
疏水结合基团X的引人成功地解释了高效甜味剂的强力效应,即所有未被 取代的糖分子都是亲水性的,与甜味蛋白受体的结合力较弱,所以不会太甜。而 通过在适当位置引人合适的疏水基团可有效增加糖分子的疏水性,从而显著增强 糖分子与甜味蛋白受体的作用力,大大提高了甜度。很显然,X疏水基团是影响 化合物甜度的一个控制因素,但并不是所有的甜味化合物都有这样的疏水部位, 因此它不是甜味的先决条件。

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