中宁县木糖醇
用4-11环糊精葡糖基转移酶设对甜菊苷转糖苷反应得率（一O—)及 环糊精世（一Q—）的影响 反应条件除坏蝴精葡糖基转移酶量外，其余《图4-9。
③糖精既不会在体内代谢（它通过体内却不发生任何变化），也不会与 DNA发生反应，这意味着糖精并不具备典型致癌物质的两大主要特征。
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
注：①根据总残留》计算;
用细菌和哺乳动物进行的体内和体外试验表明，阿力甜在基因或染色体水平 上没有毒性（genotoxichy)。在药学领域所进行的-?系列研究表明阿力甜对机体 肠H、贤、中央神经系统功能及自主评价行为（assess mitonomic)没有任何影 响，对空腹血糖水平及口服葡萄糖的分布没有影响。
酵母分泌嗦吗甜，是生产嗦吗甜另一种方法。植物嗦吗甜也由分泌产生，因 此可以模拟植物嗦吗甜的产生过程进行酵母嗦吗甜生产。而且植物和酵母的胞内 环境及输出蛋白折香、形成二硫键的细胞机制相似，因此可以推断分泌的嗦吗甜 也将具有甜味构型。将嗦吗甜丨、A、B的基因分别接在一密码序列的1末端， 该密码序列引导嗦吗甜进人细胞膜分泌途径，并最后分泌到培养基。
1985年，山田等人用含有双糖苷A及甜菊苷的甜菊提取物喂养大鼠22个月 进行慢性毒理试验，结果表明提取物对大鼠的最大无作用量是550mg/kg。另一 个2年的喂养试验表明，甜菊提取物没有慢性毒性和致癌性。R. E. Wingard等人 的活体外试验表明，大鼠肠逬微生物能将甜菊双糖A苷降解成甜菊醉，转化率 大约为65% ,而相同条件下甜菊苷则几乎全部转化成甜菊醇。
虽然巨大芽孢杆菌NCIB 8508被认为是质子移变型的，但通过在培养基中加 人0. 2%的酵母提取物可以促进其生长并提髙G -6 - a的得率。值得注意的是， 只有处于生长旺盛期的菌株才能分泌出G -6 -a，当细胞生长进人静止期时， G-6-3在培养基中的含量也达到最高水平，因此对0.4%的葡萄糖介质来说， 发酵总是在5 ~6d后得到丰收。
带有芳香基团取代基的二肽甜味剂如图2-92 所示，二甲基-甲氧基苯酚类似物[图2-92 (1)]的甜度约为蔗糖的5_倍，不带甲基后 [图2-92 (2)]甜度减半（25000倍）；二甲基苯 基类似物[图2-92 (3)]的甜度为蔗糖的4000 倍，而3 -苯基丙烷基类似物的甜度只有蔗糖的 1000 倍。
明石等人用含有甜菊苷和双糖苷的提取物喂养大鼠3周.没布发现它有任何抗 生育活性，这一结果与Planas和Kue的发现相矛质。Wanas和Kue用甜叶菊提取 物喂养大鼠2个月，发现它有明显的避孕作用。我们认为这之间的矛盾是由于他们 所用的原料不同所引起的，因为明石等人所用的原料仅含二萜苷成分，而Planas 等人使用的是甜菊叶、茎干燥粉的热水浓缩物。叶子中含有的成分较多，其中有些 成分如黄酮类化合物，包括5，7，4'-三羟基黄酮是具有抗生育活性的。
