颍东区蔗糖素
不同的有机溶剂，也会影响合成速率和平衡得韦。押论和实验都表明，乙酸 乙酯是最好的溶剂（表2 -7)。根据上述结论，我们分别用活塞流式反应器 (plug flow type, PFR)和连续搅拌釜式反应器（CSTR)进行试验，用固定在 Amberlite XAD-7的嗜热菌蛋白酶进行连续催化反应。首先将80mmol/L Z - Asp ^ 200mmol/L PheOMe溶解于饱和乙酸乙酯溶液，然后以外=1.5/h连续加人 PFR中，体系温度保持在40T。初始阶段反应得率>95%，反应进行80h后, 下降到30%左右（图2-26)。固定化酶发生了钝化，其主要原因是：在PFR 中，底物浓度在人口处最大，顺宥出口方向逐渐减小，人口处高浓度的Z-AsP 使嗜热菌蛋白酶的主要稳定因子Ca2<被螯合脱去，而且人口处固定化酶内部的 pH最低，使更容易被脱去。在底物中加入5mmol/LCa[ Z - Asp =80m?K)l/L, ct = 15。
一、二氢查耳酮的种类、来源与结构
0.1 -0. 4mol/L NaH2P04 (或 MES 或 Bis Tris propane)缓冲溶液中，在 pH5. 5 - 8.0、温度22~40弋的条件下反应2?48h。反应体系中的溶剂、pH、缓冲溶液 的浓度和反应温度都会影响酶的活性，但对酶的选择性的影响比较小。反应过程 中乙腈等有机溶剂的比重不能超过50%，如果超过，溶剂体系会使酶发生改性 而降低水解率。反应温度的升髙会加快反应速率，但会使反应的选择性有所降 低，反应最佳温度应控制在22-40T。
四、利用全基团保护法生产三氯蔗糖
采用电穿孔法，将质粒转至产朊假丝酵母(Candida ulUis)中。该方法较简 单并能实现Candida utUis的高效转化。对转化条件进行优化以达到最优转化率。 据研究，酵母在最优电脉冲转化率下存活率为50% -70% ,因此通过调整场强、 内阻和电容大小，使Candida utUis的存活率达10%?70%。在加了4(Vg/mL CYH的YPD平板培养基上培养C— ulUis转化体（4(Vg/mL CYH是野生塑 Candida ulilis能在YPD培养基生长的最高浓度），进行CYH抗性转化体选择。 YPD培养基组成为：2%葡萄糖、l%BaCto酵母抽提物、2%Bacto蛋白胨。由于 电脉冲导致酵母细胞膜的破裂，使细胞对渗透压更敏感，因此电脉冲处理后细胞 立即在YPD培养基上培养不形成菌落D电脉冲处理后细胞立即分散在选择性培 养基，也不能得到CYH抗性菌落，需在30弋含lmol/L山梨糖醉的YPD培养基 上预培养一段时间后，再转移至含CYH的培养基才能得到转化子。
在第三种机理中，刺激物分子不可逆地进入接近离子载体的“有序排列队” (orderly queue),这条排列队的物理长度决定了持久性。三种机理中前部分离子 载体阶段与第二种机理相同。
表2 -S3 L-天冬氨酜-甘氨酸藤的结构与甜度
近年來日本的Kirin公司已将莫奈林表达于产脘假丝酵母（C.u/i7/5)，这在 莫奈林的开发上已跨出重大的一步。与此同时，美国FDA已批准产脘假丝酵母 (C. utUis)为“公认的安全物质”（GRAS)。这一切将使莫奈林的研究开发和商 业推广获得新的转机。
由于莫奈林分子中较为稳定的a-螺旋结构含量较少，其完整的三级结构因 而较易受到各种变性剂的迅速破坏。变性的结果导致了三级结构的无序化，分子 甜味随之丧失。但构象上的轻度变化是可以容忍的，并不会导致甜味的完全消 失。用十二烷基硫酸钠或50%乙醇溶液处理，造成货奈林蛋白质变性并失去了 甜味，分子中a-螺旋结构的含量有所增加。但用25%乙醇溶液处理，不会引起 构象和甜味的变化。莫奈林对碱十分敏感，值单独由于喊引起的变性而造成紧密 肽链结构的伸展现象还是可逆的。例如，pHlO.9环境下引起的变性，当用酸调 节至PH3.3时，其三级结构仍可恢复。此时，尽管分子的整体构象并没完全恢 复，但甜味却部分恢复了。
