保靖县甘露醇

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保靖县甘露醇

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四、三氣蔗糖的甜味分子识别
在第-?种机理中,糖分子接近味细胞黏膜上的离子通道激发处(ion channel triggering site),打开离子通道(离子载体),迫使一束钠离子流或钾离子流流进 或流出细胞。如果这类基本离子载体数进足够多,则就能够产生足够多的离子流 来获得潜在的动作及刺激味神经细胞,那么其反应强度当然能够确定。但是,刺 激物分子与离子载体相结合的反应强度最终取决于所获得的离子流,而持久性则 与分子继续作用的时间有关。
转糖苷反应中的产物变化情况
在pH9, W素6mol/L ,抚胺丨OOmmol/L、堪屮烷盐酸50mnol/L的绂 冲液屮进行Sephadcx G - 25柱(2.2cm x 45cm )凝皎过滤
阁2-24 40^€时,pH和Z-Asp-PheOMe合成平衡得书关系阁 注:①?春-、-△-、-▲-、?□?、-■?表示在不用底物浓度和a值妞合时,Z-Asp-PhrOM*?在有机相的 得牟;②-Z - Aap = PheOMe = 80mmol/L, a = 1;③-A-, Z - Asp = PheOMe = 80ramol/L, a *5;④-▲-,Z - Asp = PheOMe = 80mmol/L, a = 10;⑤-Z - Asp = 80mmol/L, PheOMe = 160mmol/L, a =10;
棉籽糖水解法没有分离上的问题,所使用的《 -半乳糖tT?酶也可以很经济地 获得,并以固定化的形式使用。同时,三氣蔗糖还可以从反应溶剂中被选择性地 结晶出来,从而使反应向正方向进行,并减少回收成本。可惜的是,目前棉籽糖 还未实现工业化生产,它必须从天然糖源(如甜菜糖蜜或棉籽粉)中分离出来, 或经过半乳糖苷酶从半乳糖和蔗糖合成而得,因此无法满足工业化生产三氣 蔗糖对原料棉籽糖的需求。另一个突出的问题是,四氣化棉籽糖的水解速度很 慢,特别是要达到60% ~70%以上的水解率就需要更长的时间。因此,本方法 的经济效益尚体现不出来,目前只有理论上的研究价值。
表2 -70 各种构象布居数的计算值和实验值
Brazzein具有高度的热稳定性,目前所获得的NMR结构淸楚显示了这一分 子特性的结构基础。Bra^dn具有4对二硫键,Kohmimi M等以嗜热菌蛋白酶酶 解法结合质谱法测定Brazzein的4个二硫键分别位于蛋白分子内Cy?4 -Cys52、 Cysl6 - Cy?37、Cys22 - Cys47、Cys26 - Cyre49 区域,其交联作用使 Brazzein 整个 分子紧密折狰,如图5-22所示。二硫键Cys22 - Cys47和Cys26 - Cys49将a螺 旋固定于芦折香的链11 (strand D )(残基44?50), 二硫键Cysl6 - Cys37将 310锞旋固定于折盎的链HI (strand ID)(残基34~39),分子的N端和C端也 通过二硫键Cys4-Cys52相交联^正是通过这种二硫键的交联作用,使Brazzein 整个分子紧密折魯成一牢固的空间结构,从而产生优异的耐热性能o
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸(甲硫氨酸)[图5-24 (2)], 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸,经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化,因此用快速定点突变将核酸酶基因(SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸(正亮氨酸)对核酸酶活性没有影 响,SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点,这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因(SW基 因)插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间,得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生,蛋白质在lac启动子的控制下生产。

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