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秀峰区蔗糖素

秀峰区蔗糖素 至于MNEI,也已被合成且克降于带有T71ac启动子的pET -22b +的载体 中,并于大肠杆菌BL21 (DE3)中得到表达。最近,单链莫奈林基闪MNE丨已 在大…

秀峰区蔗糖素
至于MNEI,也已被合成且克降于带有T71ac启动子的pET -22b +的载体 中,并于大肠杆菌BL21 (DE3)中得到表达。最近,单链莫奈林基闪MNE丨已 在大肠杆菌偏爱密码子的基础上被设计出来,从而优化了基因在大肠杆菌中的表 达。这些合成莫奈林基因被克隆于含T7启动子的PET-22 b载体。SDS-PAGE 分析结果表明,重组莫奈林的产虽髙达总可溶性蛋白的45%。
通过研究发现核糖体L41蛋白中的第56位氨基酸决定了酵母对CYH的敏感 性或抗性。56位氨基酸为谷氨酰胺时该蛋白为抗性蛋白,56位氨基酸是脯氨酸 时为敏感型蛋由。这也在CYH抗性酵母Candida mallosa、Kluyveromyces lactis和 Schwanninomyces cerevisiae 的 L41 蛋白得到了证实。对于 CYH 敏感型 Saccharomy- ces cerevisiae^将其L41蛋白第56位氨基酸的密码子用谷氨酰胺的密码子替换后, 细胞就具冇了 CYH抗性。
毒性试验中也出现了唯一与纽甜有关的可逆转的临床生化变化,在给兔、狗 做为期13周剂量为0.6g/(kg_d)和为期一年剂鱼为0.8g/(kg ? d)的试验时, 出现了特异的肝脏碱性磷酸酶升高(4~5倍于对照组)。其他肝功能试验(如天 冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶、谷氨酰转移酶和总胆色素)都没有改变,也没 有肝、胆道、胃肠道或骨的组织病理学发现。动物的单一碱性磷酸酶活性可以在 没有任何病变的基础上升高,是一种生理的适应,尤其是当环境改变时,并不是 添加纽甜所特有的。有试验也显示出人在食用13周纽甜以后没有出现碱性磷酸 酶和其他肝功能试验的改变。这表明在给予数千倍于预测消耗剂量的纽甜,在 兔、狗身上所观察到的可逆转的种系特异的血浆碱性磷酸酶活性升髙现象,是一 种非特异性的生理反应而不是毒性作用。
Assadi - Porter等应用基因突变技术探索 Bragin甜味功能位点,发现蛋白的两个结 构K域对甜味活性至关重要:一是蛋白N端 和C端相互紧靠的区域,二是43位精氨酸 附近的可变环区。
Boeslen等催化还原N -苄氧羰基-L - a -天冬氣肤-L -苯内氨酸-丨-甲 酯和3,3-二甲基丁醛制备纽甜。将一定摄的苄氧羰基-L-a-天冬氨 酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯和3,3-二甲基丁醛加人到甲醇与甲基异丁基甲酮 (甲醇含量为45% ~90%质量比)的混合溶剂中,同时加人2%?丨0%的碳钯催 化剂,先通氮气一段时间再通氢气反应,反应温度26~65t,常压下反应,反 应持续1?20h。反应结朿通人氮气终止反应。过滤去除催化剂,滤液中加入足 量的水,在旋转蒸发器上减压共沸蒸发去除有机溶剂甲醉和甲基异丁基平酮,蒸 发温度为25~7(TC,过高会有副产物的产生,过低则不容易去除有机溶剂。然 后冷却到40尤以下结晶得到目标产物纽甜,可以用冷水冲洗或重结晶制取更卨 纯度的纽甜,晶体在80T以下减压干燥。干燥温度高于80T可能会导致纽甜的分 解或副产物的形成。整个反应过程,副反应少,产率高(>95%)。类似的还有用 /V -甲酸签_ L _a _天冬氣醜-L-苯丙氣酸_ 1 _甲醋、N-甲基-L -a -天冬 氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯、苄基-L-a-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲 酯、/V-对苯基径氧基碳基-L-cr-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-1 -甲酯等进行纽甜 制备。
5.5(与阿斯巴甜的很接近)D
五、阿力甜的应用
达水平没有区别。但是在rDNAK整合的质粒转化体,在非选择性培养基上 培养50代后,莫奈林产量明显下降,而整合点在UKA3区的质粒的转化体 中没有明显下降,见图5-19。不带萸奈林表达盒的载体一直都保持稳定, 这说明莫奈林的高产可能会导致在rDNA区粮合载体稳定性的显著下降。且 培养50代后,pUMll转化体对CYH (4(Vg/inL)保留抗性的细胞数占总细 胞数的80% -100%, pCLRM216和pRM丨丨转化体为0% ~ 30%。这些结果 表明URA3区是在C. utilis中最优多拷贝整合点。URA3栽体除能维持载体序 列稳定外,它还在转化前去除了细菌序列,这对于食品工业蛋白质生产是很 有益的。
(三)三肽、四肽和五肽化合物

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作者: 中国甜味剂网

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