晋安区麦芽糖
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
甜味分子多点结合模型根据多点结合甜味理论，可以合理构造出各种甜味分子及其衍生物的多点结 合模型。首先确定甜味分子的两个特征结合点，即结合部位D (4-苯腈基）和 结合部位B (C02_或氧原子），然后就可以准确确定甜味分子的其他结合部位。
采用高效液相色谱（HPLC)对精制后的三氣蔗糖产品进行鉴定，与Tate & Lyle公司所提供标准样品的HPLC分析谱图比较，确定三氣蔗糖终产品的纯度 为 99%。
二、三氣蔗糖的甜味特性和非致龋齿特性
第三章庚精衍生钾
有人曾试图通过巨大芽孢杆菌(B. megaterium) NCIB 8508直接发酵蔗糖， 来生产S -6-a,但蔗糖转化酶的活力却导致了主产物是G - 6 - a而不是S - 6 -
用4-11环糊精葡糖基转移酶设对甜菊苷转糖苷反应得率（一O—)及 环糊精世（一Q—）的影响 反应条件除坏蝴精葡糖基转移酶量外，其余《图4-9。
由于从阿斯巴甜制备纽甜的低成本（一步完成的高得率反应）和纽甜的高 甜度（相对于10%蔗糖溶液的甜度约为6000倍），表明纽甜的单位甜度成本与 市场上其他甜味剂（包括阿斯巴甜和三氣蔗糖）相比，具有很强的竞争力。
②甜菊苷被肠内微生物分解成甜菊醇和葡萄糖；
