柘城县阿斯巴甜
天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸（甲硫氨酸）[图5-24 (2)]， 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸，经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化，因此用快速定点突变将核酸酶基因（SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸（正亮氨酸）对核酸酶活性没有影 响，SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点，这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因（SW基 因）插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间，得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生，蛋白质在lac启动子的控制下生产。
因为嗦吗甜分子能与食品或饮料中的阴离子组分发生反应，因此，在不降低 分子总体甜度的前提下，人们正致力于降低嗦吗甜分子总电荷虽的研究。阿拉伯 胶及其微酸性聚合物能阻止嗦吗甜与合成包素的反应。往嗦吗甜溶液中添加至少 6份（但不多于20份）阿拉伯胶能阻止它与酒石黄、口落黄或丽春红-4R—类 色素结合而发生沉淀或浑浊现象。即使将阿拉伯胶-嗦吗甜混合液离心处理也是 如此。当阿拉伯胶添加量超过20份时，嗦吗甜的甜味有所受抑制，至少比添加 6份时的甜度低，而且溶液也不很稳定。较好的比例是9份的阿拉伯胶添加1份 的嗦吗甜，这样配制出的混合物体积大，易于操作。这种混合物还可与麦芽糊 精、乳糖或山梨糖醇混合，以利于进一步发挥填充剂的物理性质。因为嗦吗甜的 甜度很大，即使添加了很大数世的填充剂，如1份的嗦吗甜添加20份的填充剂， 其甜味特性也没受到明显影响。往饮料中添加5mg/kg的嗦吗甜能增强产品风 味，此时苒添加lOOmg/kg阿拉伯胶，产品的稠度和口感也不会发生什么变化。
第二章L真箝甜味敗一份番茄汁代谢所产生的甲醇大约是用100%纽甜增甜的等萤饮料所产生的甲醇 的200倍。因此，可以认为纽甜是安全的。
180-200^
1%9年全面禁用后，除f Abbott实验室外，美国的其他所有厂家均停业生 产。之后，日本也相继禁用，只剩下其他一些国家，主要是巴西、南非和印度尼 西亚还有些市场。然而，欧洲仍允许使用，因此当时德国和西班牙反而建厂 生产。
1975年，日本石用和横山两人让小鼠摄入含7.0%甜菊苷的饲料56d后，没 发现其血糖值有何变化。而与之相反，须须末等人于1977年报道喂养10%的干 燥甜菊叶（相当于摄入占膳食总量0.5%的甜菊苷）4周后的动物的血糖值显著 下降。但1979年Lee等人报道每天喂养0.5 ~1.0g的甜叶菊提取物，56d后并没 有发现有何影响。
图4-10比较了两个酶反应体系中可用简单的离心方法分离的残留淀粉量。 由于挤汛膨胀淀粉以悬浮状态存在反应混合体系中，因此大多数残留淀粉经离心 (3000g, lOmin)得到分离，而传统体系中残留液化淀粉很难分离。
用来与甜菊苷混合的最常用物质是环状糊精。-环状糊精可专用来掩盖 提取物苦味，y-环状糊精可用来掩盖苦涩味，带盐环状糊楮可改善产品的整 体风味。此外，还可用来混合的物料包括葡聚糖、刺槐豆胶和组氨酸盐酸化合 物等。
将苯酐和冷冻的氨水依次加入酰胺 化反应锅内，升温后缓慢加人氢氧化钠 溶液，调pH = ll?12，保温0.5h反应，
这些实验结果还可探讨莫奈林的甜味活性区域。重组SCM可像天然莫奈林那样 产生甜味反应。研究人员已通过生产规模装置，利用酵母菌株AB110对SCM进 行了大规模的生产和纯化。SCM基因是被克隆于携GAPDH或ADH2启动子的 pUC栽体的。把带有ADH2启动子的菌株S于450L中试规模的发酵罐进行发酵， 最终可获得54g具有甜味的纯化重组SCM。
