东港区甜蜜素
达水平没有区别。但是在rDNAK整合的质粒转化体，在非选择性培养基上 培养50代后，莫奈林产量明显下降，而整合点在UKA3区的质粒的转化体 中没有明显下降，见图5-19。不带萸奈林表达盒的载体一直都保持稳定， 这说明莫奈林的高产可能会导致在rDNA区粮合载体稳定性的显著下降。且 培养50代后，pUMll转化体对CYH (4(Vg/inL)保留抗性的细胞数占总细 胞数的80% -100%, pCLRM216和pRM丨丨转化体为0% ~ 30%。这些结果 表明URA3区是在C. utilis中最优多拷贝整合点。URA3栽体除能维持载体序 列稳定外，它还在转化前去除了细菌序列，这对于食品工业蛋白质生产是很 有益的。
七、利用棉籽糖水解法酶法生产三氯蔗糖
(1)片状、粉末状或溶液状的餐桌甜味别。
可是，由于邻二硫二苯甲酸结构上的空间障碍，与甲醇酯化需在髙压釜中进 行，反应条件较苛刻，对反应设备要求太高，只进行过中试，也没有实现工业化 生产。
(二）提高反应平衡得率的途径山式（2-5)知反应平衡得率会受底物浓度5。影响。S。增大，平衡得率增 大。在 L/ [H20] =0.5 (mol/L)-1, S0 = lmol/L A,平衡得率提髙至 11.8%，与5。=0.丨》1101/1.时的平衡得率4.55%相比增加不明显。由于通常在羧 基或氨基末端有保护基团的氨基酸溶解度很低，即底物氨基酸浓度不可能增加很 多，因此通过该途径很难大幅度提高平衡得率。这里介绍几种使平衡向肽生成方 向移动的方法。
大约与此同时，意大利的研究者描述了对阿斯巴甜蛋氨酸二肽化合物构象优 先性的研究结果，认为丨^口^是其优先存在的构象。Lelj等人依据阿斯巴甜的 FiDn构象优先性，提出一个具有普遍意义的甜受体结合模型，这其中有改进的 地方是将AH-B部分翻转了 180%这个模型能合理解释阿斯巴甜的D，D和L， D非对映体为何具有苦味。在任何情况下，每一种甜味化合物都能从Shallenberger 阻碍层的对面去接近甜受体，假定这个阻碍层是完全打开的。
与糖醉或糖共同使用时味觉情况很好，特|
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
