商南县甘草甜素
⑤蔗糖C -4'位羟基的移去并不损害蔗糖的甜味，而增加C 位取代基的 大小和硫水性会使甜度显著增加。
3次动物终生喂养结果表明，三氣蔗糖及其分解产物没有致癌性，其中2次 使用大鼠为试验对象，1次使用小鼠。动物饲料中=氣蔗糖的添加最达3%，相 当于1500mg/lcg的剂萤，约是人体平均摄人萤的1500倍。
DuBois等人测定了二氢查耳酮甜味达到最大值后降低至接近消失时所需的 时间，其试验结果见表4-19。从表中我们可以明显看出，新橙皮苷二氢查耳酮 甜度达到最大值的时间要比糖精和蔗糖都来得长，且持续时间也较长。定性观察 结果表明，HDG (DI)的甜味持续时间较n短。
对脱酯化纽甜用伤寒杆菌做Ames检测（不论用或不用代谢活化），或者中 国仓鼠卵巢细胞黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶诱变检测，都没有发现纽甜的致 突变作用。体内和体外遗传毒理试验证实，纽甜和脱酯化纽甜都没有潜在的致突 变性或染色体畸变性。
//>#转化株在MDFA培养基中，30T,摇瓶培养5d，分泌型嗦吗甜的生产 情况如图5-7所示。各转化体均产朱嗦吗甜，其中采用的gdhA启动
60A突变体无论在何种酸碱条件下都无甜味，怛是，在更高的浓度下 (2. Omg/mL),这些突变体则能产生轻微的甜味。这就表明，组氨酸-30对天然 奇异果素和重组奇异果素味道修饰作用的发挥有取要意义。
在脉冲前，细胞经二硫苏糖醇（di丨hiothrehol，DTT)处理或在样品中加人载 体DNA都+能提高转化率。用标准醋酸锂程序（standard lithium acetate procedure) 将线性PCLRE2转化至CandUu utULs得到的转化率非常低，1网DNA的转 化体不到10个。
(二）阿力甜的安全毒理学分析已在多种生物体（包括人体）身上进行过阿力甜的毒理试验，结果均表明阿 力甜作为食品甜味剂是安全无毒的。表2 -38所示为部分主要的毒理试验项目。
人们已做了大最的努力以期寻出一种安全实用的添加剂来改善嗦吗甜的甜味 特性。据报道，添加些阿拉伯半乳聚糖、己糖醛酸及其盐、酰胺或内酯等，均可 部分缩短嗦吗甜的甜味持续时间。日本有一种商品“San Sweet T-100”就是通 过添加丙氨酸、食用酸（酒石酸、柠檬酸、苹果酸和琥珀酸）及填充料等来提 髙嗦吗甜甜味特性的。这种混合物能够轻度缩短嗦吗甜甜味的最初及后续延迟时 间，而且使其可感觉的甜度差不多提高了近2倍。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
