北流市低聚半乳糖
2.不同来源的《-半乳糖苷酶对产物的影响
可是，由于邻二硫二苯甲酸结构上的空间障碍，与甲醇酯化需在髙压釜中进 行，反应条件较苛刻，对反应设备要求太高，只进行过中试，也没有实现工业化 生产。
续表注：①Me 平基；Et 己基；c 环。②以摩尔教计，与2%庚糖溶液（58.4mraol/L)相比较的倍教图2 -42 阿斯巴甜、纽甜的疏水结合位图 (1)从阿斯巴甜分子出发，在人体甜受体中寻找第2个疏水性结合位（HBP)(2)在纽甜分子中第2个班水性结合位的存在
纽甜是一种两性化合物，25弋时|^,值为3.0丨，1^2值为8.02，等电点约为
醇羟基可以被多种氣代试剂氣化，如 盐酸/氣化锌、亚硫酰氣、三氣化磷等。就 反应机理而言，均按Sw亲核取代反应历程 来进行，被取代的3个羟基中，因&和r 位碳原子属于伯碳原子，可0由旋转，不存在构型转化现象，而4位上的手性碳构 型发生Walden翻转，使原来的葡萄糖构型转换为半乳糖构型，如阁3-21所示。
试验表明，4-PAS在酸（如草酸、乙酸、对甲苯磺酸及对甲磺酸吡啶盐 等）催化下发生水解反应，预计产物为4-PAS与6-PAS的混合物（两者极性 相近，柱层析无法分离），但不用分离而用乙酸在惰性溶剂中将4-PAS进行异 构化，4位的乙酰基转移至6位，最终得到单一产物，可见这是制条6-PAS最 简便的方法。
C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶（GAP)基 因，其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh ￡co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段（-976? -1，推断+丨为翻译起始位点）作为启动子，用引物在V端加上N?d位点， 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段（+ 1006? + 1728)作为终止子，用引物在V端加上BamHI位点，在V端加上Pst丨位点， 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接，构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建：从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2，在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点，构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切，并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后，与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后，与含CYH抗性 基因的丨.1比？311-5&丨1片段（-184?+974)连接，构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到，用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域（+4?+356)和 3'区域（+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段，这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段，从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段，两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间，构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和？8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
甜味强度的定量测定甜味强度的测定目前只能通过尝味评定的方法来进行，因为尚无甜度的仪器 测定法。随着生物化学的发展，如果有可能从汚头中分离出具有活性甜味感觉的 受体蛋白来，那最终就有可能出现精确的仪器测定法。丨978年，Edwadson等人 报道了一种先进的免疫分析法，可以用来测定一系列甜味化合物与被选用抗血淸 的表观结合悄况。这个引人注目的进展有可能发展到出现一种评价甜味与化学结 构关系的客观方法。
环己胺的毒性是决定甜蜜素日允许摄人最ADI值的依据。中毐现象是出 现T睾丸萎缩、睾丸重萤减少等现象。在处理有关甜蜜素和环己胺试验数据 时，这是唯一的也是二直出现的毒性，它已引起人们的关注。但在大鼠身上 进行的大剂萤试验结果是否适用于人体很值得怀疑，因为大剂萤生物试验对 人和动物所出现的结果并不一样，在人体中只有很有限的甜蜜素经代谢作用 生成环己胺。
