远安县乳糖
关于嗦吗甜在各种含水香味溶剂.(如乙醇、异丙醇、甘油和丙二醇等）中 的溶解性情况，前面已讨论过。试验表明，这些溶剂对嗦吗甜的甜味特性及风味 增效特性影响很大。例如将嗦吗甜的乙醇溶液（含乙醇60%)置于3CTC下贮藏 1周后，取出相当于2mg嗦吗甜的溶液冲稀释至lOOmL,就感觉不到甜味。而这 一浓度的嗦吗甜溶液的甜度通常都是很高的，相当于4% 的蔗糖液的甜度。 虽然贮藏后的溶液并没发生浑浊或沉淀现象，但需添加为通常数萤10倍的嗦吗 甜才会感觉到甜味，这说明大约有90%的甜味已经丧失。然而，！h以后重新品 尝这种溶液时发现甜味竟然完全恢复了。进一步的研究发现，时间对这种现象的 发生关系很大（图5-2)。
R, H2
旋= 1:12. 5，w/w)溶解时,可以尽可能地避免在反应过程中产生蔗糖脱氧环化 衍生物。因此，本研究仅以蔗糖和乙酸酐的摩尔比、反应温度和反应时间等三个 因素，分别对S-6-a的合成条件进行优化，结果如图3-29至图3-31所示。图3 -29蔗糖和乙酸酐摩尔比对取酯化反应效果的影响（-丨8*C、7h)图3-30反应温度对单酯化反应效果的影响[蔗糖：乙酸酐=0.95 (mol/mol), 7h]时 N/h围3-31反应时间对单酯化反应效果的影响[蔗糖：乙酸酐=0.95 (mol/mol),25 *C]
图2 - 88 阿斯巴甜的5种类似物
根据甜味三角理论，A和B是空间相距0.25 -0. 40nm的带负电荷的两个原 子，其中A与带正电的质子结合成为AH。AH在整体上可以是酸，B为质子受 体，可认为是碱。一个甜味分子中的AH、B系统可和位于甜味蛋白受体上另一 个合适的AH、B系统进行氢键结合，形成双氢键复合结构。甜味分子和甜味蛋 白受体的复合反应虽然没有生成新的产物，但它却引起一个依靠神经冲动传递的 甜味刺激，两者间的复合强度决定了甜味刺激强度即甜度。
总之，三肽化合物的甜度比大小相似的二肽化合物低。三肽分子之所以会损 失甜度，可能焙因为亲水性的增加以及构象的限制，使得其整体分子的形状与大 小均未处于最佳状态的缘故。Ariyoshi进一步研究了四肽和五肽化合物，在所研 究的14种四肽中有3种的甜度仅是蔗糖的0.5 ~5.0倍，7种五肽没有甜味（表 2-66)。这表明低聚肽的分子越大，接近甜受体就越困难。表2 -66 二-五肽化合物的结构与甜度
采用电穿孔法，将质粒转至产朊假丝酵母(Candida ulUis)中。该方法较简 单并能实现Candida utUis的高效转化。对转化条件进行优化以达到最优转化率。 据研究，酵母在最优电脉冲转化率下存活率为50% -70% ,因此通过调整场强、 内阻和电容大小，使Candida utUis的存活率达10%?70%。在加了4(Vg/mL CYH的YPD平板培养基上培养C— ulUis转化体（4(Vg/mL CYH是野生塑 Candida ulilis能在YPD培养基生长的最高浓度），进行CYH抗性转化体选择。 YPD培养基组成为：2%葡萄糖、l%BaCto酵母抽提物、2%Bacto蛋白胨。由于 电脉冲导致酵母细胞膜的破裂，使细胞对渗透压更敏感，因此电脉冲处理后细胞 立即在YPD培养基上培养不形成菌落D电脉冲处理后细胞立即分散在选择性培 养基，也不能得到CYH抗性菌落，需在30弋含lmol/L山梨糖醉的YPD培养基 上预培养一段时间后，再转移至含CYH的培养基才能得到转化子。
(一）利用半乳糖苷酶改性甜叶悬钩子苷
将含嗦吗甜！、A、B基因的质粒（图5 -3)转移至酵母菌株AH22和 BB25-ld,对照质粒中除没有PGK启动子和嗦吗甜基因外，其余都相同。细胞 在选择性培养基上培养后，进行分离提纯。
