富平县水苏糖

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富平县水苏糖

富平县水苏糖
以核糖体蛋白质L41基因为标记,将用32P标记的含C. makosa的RIM - C基 因的Xbal -Sau3AI片段与Candida utUis ATCC9950的基因组DNA进行DNA杂交 分析,结果表明存在一个与KIM - C基因同源的基因。对Candida ut'dis ATCC9950的DNA用Sau3AI进行部分切割后的片段(5~10kb)转人经BamHI 酶切的质粒PBR322构建基因组DNA文库,用RIM - C基W探针对约30 000个 克隆子进行筛选,筛选得到5个正(positive)克隆子,对其中3个质粒构建了 限制性酶切谱图(图5-11)。该同源基W在质粒DNA上的大致位置通过对质粒 的限制性酶切片段进行DNA杂交分析得到。将能与探针杂交的4kb EcoRI片段 双向亚克隆至质粒pBluescript II SK进行DNA序列分析,现已测定广含L41基因 的2086hP的BamHI - SacI片段的DNA序列(图5 - 12),其排序策略如图5-11 所示。
在pH9, W素6mol/L ,抚胺丨OOmmol/L、堪屮烷盐酸50mnol/L的绂 冲液屮进行Sephadcx G - 25柱(2.2cm x 45cm )凝皎过滤
1998年12月,关于批准纽甜作为食品甜味剂的申请向美国食品与药物管理 局(FDA)提交,并于2002年得到美国FDA批准,随后中国等世界很多国家也 已经批准使用。纽甜代表着当今强力甜味剂研究的最高成就,前景广阔。
由于国际上著名的脑研究杂志Brain Research Reviews 1993 ( 18) : 293 ~ 314 刊登了英国楮神病学研究所Brian Meldoun的一篇长篇评述,题目为“具有膳食 兴奋性毒素作用的氨基酸影响神经元变性疾病的研究进展”。里面再次关心到, 在美国发生脑肿瘤人数的增加情况是否与阿斯巴甜使用有关的问题。为此,FDA 于19%年11月18日发布演讲声明(Talk Paper)认为:
Kondo等人曾尝试构建一 SCM质粒并在C— idilis中生产SCM。他们把 SCM基因插入由产脘假丝酵母(C. utUis)克隆来的GAP基因的启动子和终止子 片段之间。通过这种方式,他们获得了高产虽的SCM,表达水平高于总可溶性 蛋白的50%。他们还尝试克降带S. cerevisiae GAPDH启动子的SCM基因用来生 产SCM。然而,所得的产最水平很低,仅为总可溶性蛋白的5%左右。美国一专 利公开了利用P. pastoris生产SCM的方法。首先将合成的SCM基因克隆于含有 S. cerevisiae a -因子分泌信号和GAPDH启动子的PGAPZa -载体,然后将构建的 质粒转化成P.P^tori5GS115,最后通过菌株对Zcocin的阻抗性,对转化株进行 筛选。观察发现所分泌的.1:组英奈林为一条12kji的带。SDS - PAGE分析表明, 通过该方法可获得约10g/L的SCM。这些SCM经纯化后可引起甜味。
虽然嗦吗甜是一种蛋白质,但它对热相当稳定。其稳定性与PH、温度、其 他可溶性物质(如氧气、酸性多糖及合成色素等)的存在与否密切相关。总的 说来,pH较低时,嗦吗甜的稳定性增大,当pH小于5. 5时,即使在100X温度 下加热数小时其甜度也不减弱。因此它适用于各种典型的软饮料(PH2.8~ 3.5),产品可经巴氏杀菌甚至超高温杀菌。蔗糖与葡萄糖的存在能增大嗦吗甜 的稳定性。有些酸性多糖(如角叉胶)的存在会因相互影响而使之甜度变弱, 但明胶能增大其稳定性而不降低其甜度。当pH较髙时,嗦吗甜的热稳定性变 小,但在室温、pH为8 ~9的碱性环境中仍较稳定。嗦吗甜在PH2以下环境中 可感觉到的酸味大于甜味,这可通过中和脱盐(如通过透析作用)而恢复其甜 度。嗦吗甜在PH2. 7?6.0范围内热稳定性很好,而在PH2.8~3.0附近稳定性 最好;可用无机酸或有机酸(如盐酸、柠橡酸、苹果酸或南马酸)来调节pH。
酯化反成的条件还依赖于酰化试剂的特性。蔗糖和乙酸酐在碱性条件(如 吡啶溶液)下很容易反应,结果生成较高得率的蔗糖单酯化物。但在有水存在 且为强碱性的条件下,蔗糖和乙酸酐反应更容易生成多酯化物。尽管蔗糖的酰化 反应也可以在酸件环境中进行,但酸性环境容易导致蔗糖的水解。值得注意的 是,蔗糖在吡啶溶液中与乙酸酐作用,虽然可以生成较高得率的蔗糖单酯化物, 但单基团保护法的成功不仅取决于生成蔗糖单酯化物,还要求单酯化物尽可能以 S-6-a为主。因此,选择蔗糖和乙酸酐在弱碱性(吡啶溶液)条件下反应,以 保证生成高得率的蔗糖单酯化物。
注:反应I5hc

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