凤翔县水苏糖
对转化体的胞内嗦吗甜含量测定后，发现在高产菌株中有较大一部分嗦吗甜 留在胞内。产率最高的菌株，胞内嗦吗甜含量约占总胞内蛋白的3%,且胞内嗦 吗甜也发生了部分降解。但在低产菌中胞内的嗦吗甜含量很低，这说明 A. awamori分泌系统?能已经超负荷，这就限制了嗦吗甜的产率。
莫奈林分子在酸性环境中变性所导致的甜味丧失是可逆的，但在中性或微碱 性环境中发生的变性作用则不可逆。在酸性pH条件下甚至因脲变性而引起的甜 味丧失现象，经中和后也有可能得以恢复。在较高pH下发生的变性作用，由于 形成f二硫键导致莫奈林分子发生积聚作用而沉淀析出，还产生相对分子质虽大 于7_的可溶性无味高聚物，这一过程显然是不可逆的。
2.计算机模拟识别计算机模拟技术进一步证实了以上观点的正确性，并肯定了果糖基部分在充当 蔗糖生甜团X功能部位的重要性。模拟结果表明，蔗糖分子中确实存在上述两对 AH/B双官能实体，Bdr-OH/2-O和y-OH/2-O，前者连接三个Kiei?疏水部位 X于r-H、6-H和后者连接两个这样的中心于厂-H、6-H,而且，这些疏 水部位X与AH、B基团组成甜昧三角形生甜团时的构象均与预期的顺时针方向一致。
由于弱酸高温环境中，4-PAS会发生脱乙酰基反应，或进一步发生迁 移反应得到3，4，6, 3\ 4'-五乙酸蔗糖酯，我们改用碱性乙酰基迁移法。 其反应温度为30 -601，反应温度高于601时副反应发生几率增多，低于 30弋反应过慢（如>10h),我们选取50T为试验温度。具体方法是，20g
初步的毒理试验和长期的食用历史，可以证明罗汉果所含的Mogrosides是安 全的，加上其良好的风味、稳定性、水溶性以及价格便宜等优点，Mogrosides及 罗汉果浸出液作为一种潜在的甜味剂有很广阔的应用前眾，值得大力开发C
图5 - 1所示为嗦吗甜分子三级结构示意图。
(一）酶法合成S-6-a的原理
也可以通过烟草表达莫奈林。首先合成了由噬菡体PI Cre重组酶介导的特异 ?组位点丨OXP的序列，构建了两个loxP同向重复的棺物表达栽体pGLX121. 1。 PCR定点突变了 CaMV 35S启动子元件中kozak序列，使kozak中的翻译起始密码 子ATG位于Ncol位点上。把spm基因克隆到表达载体pG〖MA的Ncol和PstI之 间，给甜蛋白8pm基因加上35S启动子和polyA及NOS终止子元件，然后克隆到 PGLX121. 1的EcoRI位点上，用农杆菌LBA4404转化烟草，获得卡那痗素抗性转 基因植株，经过PCR及southern分析，证明甜蛋白spm基因已整合到烟荩基因组 内。用转基因烟草的总RNA通过RT-PCR反转录扩增spm基因，证明了在35S启 动子及其他调控元件的控制下，spm基因在转基W烟草中转录表达出mRNA。提取 转基因烟草总蛋白，经SDS-PAGE分析，初步证明了 8pm基因在转基因烟草中表 达出目的甜蛋白。
四、Neoculin的甜味与变味机理
甘草原是蝶形花科(Fabaceae)的一种野生植物g/aZ>ra L* ,生长在 近水的深层沙质土壤中，现大多为人工种植。较好的种植季节是3月，种植后的第 三或第四年丨0月，当叶子脱落时，即可挖出其根茎，冲洗后在空气中自然干燥 4~6个月（剥皮和不剥皮均可），然后捆扎运到加工厂。通过热水处理甘草的根茎, 并经澄清、浓缩最终制得甘草甜素。商业化产品有团块状、颗粒状和黏稱状等等。
