甘洛县果糖

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甘洛县果糖

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天然Brazzein的氨基酸序列缺少端蛋氨酸(甲硫氨酸)[图5-24 (2)], 因此合成基因[图5-24 (3)]的第一个密码子前引人起始密码子Met。野生型葡 萄球菌核酸酶中含有4个蛋氨酸,经CNBr解离产生的肽链会影响Brazzein的分离 纯化,因此用快速定点突变将核酸酶基因(SNase)的4个Met的密码子用Ala的 密码子替换。SNase的4个蛋氨酸转化为己氨酸(正亮氨酸)对核酸酶活性没有影 响,SNase中蛋氨酸突变为丙氨酸会降低核酸酶的稳定性。经修饰后融合蛋白中只 有一个的蛋氨酸间隔SNase和SW K [图5-25 (2)],所得的融合蛋白表达水平 高并且核酸酶具有活性。在如-pGlul - Brazzein合成基因的5'和3'端分别加上 Ndel和BamHI位点,这样就可以克隆至任一 pET质粒。通过对天然核酸酶-卵类 黏蛋白融合基因表达质粒进行改造构建新的质粒。将Brazzein合成基因(SW基 因)插人pET-3a表达系统SNase基因C-端的Ndel和BamHI位点之间,得到质 粒PET-3a/SNase-SW [图5-25 (1)]0融合蛋A转录和翻译信号由T7表达载 体PET-3a产生,蛋白质在lac启动子的控制下生产。
Nofre等报道,以5%钯碳作为催化剂,在40T、0. 4MPa氢压下对甲醉化的 APM氢化13h,当催化剂含水量为60%,且循环使用5次后,催化效果最好。 反应结束时,氢化反应液中含NTM89. 5%、APM7. 3%、二取代APM0. 6%和二 取代脒唑酮类化合物(二肽结构物质环化形成的副产物)1.3%。将上述氢化反 应液在40T下加一定萤的水,水解3h。水解反应结束后减压浓缩至甲醉浓度为 25%,冷却析晶,并冷冻至使结晶完全。40尤下真空干燥2d可得纯度近 100%的NTM,以起始原料计,NTM的回收率为73%。
莫奈林基因已在一些微生物和植物中进行了表达,表5 - 13列出了其中一些 研究结果。
X疏水基团的引入同时也成功地解决了与甜味相伴的手性反常问题。因为 AH、B甜味理论不能解释这样一个事实:大部分D-氨基酸是甜的,但它的 L-对映体却不甜;而糖的D、L-对映体则都是甜的。AH、B. X甜味三角理论 认为,甜味蛋白受体的三个结合基团(一NH/、一0H、一R)是呈顺时针方向 排列的,因此甜味分子中的AH、B、X (如果有的话)生甜团只有呈顺时针方 向排列时才能和同样以顺时针方向排列的甜受体发生键联,从而产生甜味刺激, 如图1 -12所示。
+NH2S0,Na ?QH.jNHSOjNa + NH3 t
研究表明,S-6-a与Vilsmeier试剂在特定参数下可选择性地进行氣化反 应,获得相应的6-乙酰基三氣蔗糖(TGS-6-a),而且得率很髙。有关资料 认为,1 mol S-6-a最好与21 ~45mol Vilsmeier试剂反应,S-6-a在溶剂中的 浓度以5% ~45%为好,温度丨15~125弋。从理论上分析,lmolS-6-a只需与 3mol Vilsmeier试剂反应,而且过量的酸性Vilsmeier试剂会给设备设计与反应条 件易控制性等带来严重闲难。进一步试验证明,当S-6-a: ViUmeier试剂= 1:13 (mol/mol), S-6-a浓度为10% (w/v)时,反应过程中产生大最黑色沉 淀,是由于S-6-a炭化造成的。故本研究选取Vilsmeier试剂:S-6-a =5 ~ 9 (mol/mol), S-6-a 10% - 20% (w/v),温度 llO-UOt,时间 2.5~4.5h 为研究范围。
在C-6’位上的进一步氣化能提高甜度,制得的4,6^-三氣-4,1',
在pH9,尿素6mol/L、/?_汰基乙W200mmol/L.三紙基中烷盐酸丨OOmmol/L 的级冲液,加入嗉吗甜至丨0-20mg/mL,通氮气,37t保持3b
“在对试验动物进行的甜蜜素及其主要代谢产物环己胺长期生物试验评价之 后,癌症鉴定委M会一致认为几乎没有可以信赖的數据表明甜蜜素是致癌物质, 不管何种性别的受试动物及何种组织器官均是如此”。
Baiyunoside的甜度楚蔗糖的500倍,甜味延绵,甚至可持续lh。现在有人 提出一种通用的葡萄糖苺化方法,可用来合成制备Baiymioside,或对该母体化合 物进行改性处理以期获得一种甜味特性更好的糖苷化合物。至今未见到有关 Baiyunoside安全毒理方面的研究文献。

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