光泽县山梨糖醇
不同甜味剂之间的增效作用是甜味的一个特殊现象。但是，这一现象长期以 来都无法在分子水平上得到解释。Morini等通过对人体序列的建模研究，首次为 这一现象提供了可能的解释。在利用mGluRl谷氨酸受体的配体结合区域的A (闭合）链和B (打开）链研究甜味受体的人体T1R2和T1R3序列组成的所有 可能的二聚体时，研究人员很快发现两个“A盥部位”都太小以至手不能容纳 最大的非蛋白甜味剂，但是它们可容纳至少四种化合物一t糖精、阿力甜、阿斯
包括酰胺化、霍夫曼降级、酯化、重氮、
融合蛋白提取过程中应加人一定量的钙离子，这样能稳定和活化核酸酶。当 不加钙离子时，融合蛋白提取得率很低，这表明核酸酶活力增强会增加融合蛋白 在内含体的溶解庞。
(三）环原酸酯法（单基团保护法）
人们用Streptococcus mutans侵染Sprague - Dawley小鼠，进行5氣庶糖的致躺 齿特性研究。小鼠摄入含三氣蔗糖或蔗糖的饲料，经35d的持续侵染试验。结果 表明三氧蔗糖组动物的S. mulan^生存率下降为原来的1/20，龋齿率较控制组减 少 50%。
1978年马里兰国家牙科研究所就嗦吗甜对大鼠的致龋齿特性做了专门评价，结 论是嗦吗甜不会引起牙齿龋变，但也不会抑制龋齿现象发生，即不具抗龌齿活性。
质粒pET-3a/SNase-SW转化至大肠杆菌BL21 (DE3) /pLysS菌株进行表 达。采用pLysS菌株可以消除引人前核酸酶的不利影响，更有利于核酸酶- Brazzein融合蛋白的表达。转换后在37T加人100|xg/mL阿司匹林、34jjig/mL氣 霉素的Luria培养基（LB)中培养一段时间后，加人IPTG后培养2~3h，大肠 杆菌中分子质萤23ku的融合蛋白产量达到最大，多数在内含体沉积，在16%的 Tricine凝胶中50%?70%的融合蛋白不溶。内含体蛋白经电泳凝胶提纯后，大 部分融合蛋白重新折黉(refolded),提纯纯度> 80%。经CNBi?处理后， 50%?70%融合蛋白发生解离，这说明融合蛋「丨不能完全解离。因Brazzein酸性 较强，p/约5.4，而核酸酶碱性较强，p/9.4，因此融合蛋白解离后用阳离子交 换色谱即能分离产物。纯化得到的重组Brazzein具有较高纯度及正确的分子质量 (6.4ku)0解离后得到的肽链与^-pGlul -Brazzein序列相同，甜度是植物提 取Brazzein的2倍，与从植物中分离得到的如-pGlul - Brazzein甜度相当。已 研究表明蛋白质只有在折垒正确时才具有甜味，未折垒(unfolded)或折奋错误
5.5(与阿斯巴甜的很接近）D
除了对二氢氧氮水环二氧化物环上不同取代产物进行研究外，人们还合成r 结构类似的化合物以观察环上的变化对其甜味的影响悄况，但没发现其他任何新
已知TCK只有在亲水的溶剂中才能高度溶解，但在保证酶解反应能得到 必要的水的前提下，a-半乳糖苷酶却被证明在与水不互溶的有机溶剂中， 最稳定并具有最高的活力。这个矛盾，可以通过使用被含水缓冲液预饱和的 有机溶液时得以解决。研究发现，高水混溶的溶剂如二氣六环、丙酮、甲醇 和四氢呋喃等，即使使用高达30%的含水缓冲液进行预饱和，也不支持 a-半乳糖苷酶的水解反应。但在含水缓冲液预饱和的正丁醉、甲基异丁基 酮和乙酸乙酯三种溶液中，TCR的溶解度均达到50%以上。这些溶剂同时 也支持a-半乳糖苷酶的活力，只是三者对三氣蔗糖的溶解性存在很大的差 別，如表3-9所示。
