肥城市结晶果糖
从植物中分离得到的Brazzein有几种结构，其中主要构型中的末端氨基酸 是焦谷氨酸（pGlu)[围5-24 (1)]0另一构型除末端没有该氨基酸外，其 余均相同，称为de8-pGlul -Brazzein [图5-24 (2)]t它的甜度是主要构型 的Brazzein的2依。按des - pGlul - Brazzein的氣基酸序列采用大肠杆菌优选 密码子合成的基因如图5-24 (3)所示。合成的Bra^ein基因若直接克隆至 质粒 pET-3a、pET-9a、pET - 1 la 和 pET - 16b 得到的 Brazzein 表达水平均 很低，只有pET-3a和pET-9a得到少量可溶的Brazzein。pET载体通常能使 外源可溶性蛋白如葡萄球菌核酸酶表达，葡萄球菌核酸酶与Brazzein的显著不 同是葡萄球菌核酸酶的氨基酸数目>100，且没有半胱氨酸或半胱氨酸含S很 低。若采用两种基因融合生产目的蛋白融合体的表达水平较髙，因此将 Brazzein合成基因插人葡萄球菌核酸酶表达系统。该策略经大肠杆菌生产鸟类 卵黏蛋白区证实很成功。
а,为此，人们希望利用菌株突变作用来解决这一困难。然而目前已筛选出的一 些具冇此种特性的杆菌突变菌种，仍具有蔗糖转化酶活力，而使用转化酶抑制剂 也没有取得满意的结果。
表2 -70 各种构象布居数的计算值和实验值
1975 ~ 1978年间，明石和光桥发表了数篇论文报道了这方面的研究情况。 他们以2.5g/kg剂最的甜菊苷喂养小鼠1个月，以5g/kg剂量的较纯提取物（含 甜菊苷40% -55%)喂养小鼠5个月，均没发现任何毒性反应。
(3)阴影框所示为的倌兮序列和B2蛋I1丨氨《?袖部分（SS-B2);粗黑线所示为 KEX2序列：方框中*头所示为嗦吗甜D合成基因（tha) ； T^c,为S. 的转录终止子。
应，然后加入适话的亚硫酸氢钠溶液，料液转稀后，再加入热水溶解，静置后分 离、过滤，分取油层得邻氨基苯甲酸甲酯（简称甲酯）。先将由水、硫酸与盐酸 配制好的混酸置于重氮锅内，冷却后开始缓加甲酯和亚硝酸钠溶液的混合液，觅 氮温度保持在25T以下，反应终点时淀粉碘化钾溶液显淡紫色，产物为邻硫酸 (盐酸）觅氮苯甲酸甲酯溶液（简称重氮液）。
其他还有许多国家和地诸如澳大利亚、加拿大、徳国、新西兰、西班 牙、比利时、墨西哥、以色列、西非、丹麦、瑞士以及其他一些欧洲国家均已批 准使用，可用于食品、饮料、医药品及化妆品上作甜味剂或风味增强剂。无疑， 嗦吗甜是一种很有发展前途的性质优良的天然食品添加剂。
