永顺县木糖
也可以通过烟草表达莫奈林。首先合成了由噬菡体PI Cre重组酶介导的特异 ?组位点丨OXP的序列，构建了两个loxP同向重复的棺物表达栽体pGLX121. 1。 PCR定点突变了 CaMV 35S启动子元件中kozak序列，使kozak中的翻译起始密码 子ATG位于Ncol位点上。把spm基因克隆到表达载体pG〖MA的Ncol和PstI之 间，给甜蛋白8pm基因加上35S启动子和polyA及NOS终止子元件，然后克隆到 PGLX121. 1的EcoRI位点上，用农杆菌LBA4404转化烟草，获得卡那痗素抗性转 基因植株，经过PCR及southern分析，证明甜蛋白spm基因已整合到烟荩基因组 内。用转基因烟草的总RNA通过RT-PCR反转录扩增spm基因，证明了在35S启 动子及其他调控元件的控制下，spm基因在转基W烟草中转录表达出mRNA。提取 转基因烟草总蛋白，经SDS-PAGE分析，初步证明了 8pm基因在转基因烟草中表 达出目的甜蛋白。
一、马槟榔
如图2-75所示，一种称为“后向旋转”（rHminvereo)的肽改性法，是将 酰胺结构中通常的羰基和含氮基团颠倒过來。在现有条件下，是连接于内二酸衍 生物上已被酰化的1，1 - 二氨基烷烃来代替通常的酰胺键连基团。D-丙氨酰胺 经后向旋转后得到的化合物，其甜度可增至900倍（表2-51)。2, 2, 5, 5- 四甲基环戊基化合物[94]的甜度很大，而2, 2, 4，4 -四甲基-丨hietane [96]的甜度要弱一些。1, 1 - 二氨基烷烃部分的R或S立体异构体[94]与 [95],它们的甜度相似，但是，经二甲基化后的化合物[97]，其甜度只有 [94]的一半。对于小基闭（如平基）来说，只要立体化学上允许就可进行双取 代。这对于以低成本的外消旋丨，1-二氨基烷烃来制备这些甜味化合物，具有重 要的实际意义。很显然，甜受体在接受“上面”基团时具有一定的灵活性。
莫奈林娃从D. cumminsii的浆果果肉中提取出的甜味蛋白一般用水法抽提， 抽提液经离心分离、超滤浓缩后用离子交换色谱法提纯楮制，再经超滤脱盐后冷 冻干燥。起初，1kg浆果只能获得100?150mg的莫奈林，现在的提取得率已提 髙至3~5g。大批量处理时，可使用分批吸附法。先将水抽提液与分散在 0.02nu,l/L醋酸铵缓冲液（PH5.0)的吸附剂CM - Sephadex C25淤浆混合，接 着用水反复冲洗淤浆达到纯化的目的，然后用0.02mol/L NaCl溶液将吸附在 Sephadex上的莫奈林洗脱下来，超滤浓缩后冷冻干燥。这样分离得到的莫奈林， 若在离子交換色谱柱上分别用NaCl浓度呈梯度上升的PH7. 6和PH8. 2缓冲液进 行洗脱，还可进一步分级成5种纯组分，依次称为莫奈林I ~V,其中最主要的 是莫奈林IV。
在一个长达2年的动物喂养试验中，分别用0%、0.1%、0.3%和1%浓度 的纯度为95. 2%的甜菊苷喂养小白鼠，雄鼠喂养22个月，雌鼠喂养24个月， 然后取雄、雌鼠各10只进行临床和病理学分析。结果表明，0.3%剂量组雄、雌 鼠出现轻微的生长延迟现象，丨％剂量组出现短暂的生长停滞现象，所有试验组 和控制组在总体外观、悄感与行为方面均无多大差异。喂养6个月后尿液、血 液、血生化特性及器官重里发生了一系列的变化，但喂养丨2个月及最终的喂养 结果并没发现这些差别。肿瘤病变与否及其严重性均与甜菊苷的摄人水平没有直 接的关系。
Hellekant等通过人体和动物试验研究Brazzein的甜味特性。非人类灵长类动 物的dmrdatympani味觉神经的记录表明，在旧大陆类猴中，Brazzein可刺激其 对甜味剂有反应的神经纤维。新世界猴则对Brazzein的刺激完全没反应。
二氢杏耳酮最主要的优点是甜度大、性质稳定、口感淸爽。然而，由于其甜 味来得太慢、后味太长，加上带有轻微的甘草或薄荷醇之类的苦后味，又因其水 溶性很差，因此仍未被广泛应用。同时美国食品与药物管理局认为已有的毒理试 验尚不能确立它的食品甜味剂地位，这就更阻碍了它的应用。据推测，如果其安 全性问题得到确认后，二氢查耳酮可能在欧洲一些国家有些市场。目前，世界上 已有比利时等少数几个国家批准二氢丧耳酮的使用。
仙茅蛋A显著的氨基酸序列相似性，可以推测它们的结构也相似，因此可以根 据GNA的三级结构建立仙茅蛋白的结构模型。经建模研究表明，仙茅蛋白和 GNA总体结构非常相近，与GNA—样，仙茅蛋白含三个子域；均由4个卢- 折祛构成，及由4个氨基酸（在GNA中为Gln、Aspx Asn和Tyr)构成的甘露 糖连接点。但由于某些氨基酸的变化引起了立体障碍，仙茅蛋白的甘藤糖连接 点没有作用，不能连接甘露糖。仙茅蛋白和GNA具有高度的序列相似性，可 能是因为它们分类学上的相同性，它们分属的mm/is ( Amaryllidaceae) 和 curculi^o latifolia (Hypoxidaceae)类别，都属于 Asparagales 目。然而，虽然它 们具有高度的序列相似性和潜在的甜味构型的相似性，其生物活性则完全不同。 仙茅蛋白具有甜味和变味性质，它的生理学作用是否用来吸引动物摄取果实以 传播种子（这对种的生存是觅要的）还不确定。GNA是没有甜味和变味性质 的连有甘錤糖的植物凝血素，其生理学作用也还不淸楚，但有明显的迹象表明 该外源凝血索具有保护作用，能防止昆虫的叮咬。将雪花莲的植物凝血素在烟 草植物中表达，结果显示对蚜虫的抗性增强，这表明这两种蛋白的生物功能是 不同的。
一、甘草甜素的化学结构
