钢城区低聚半乳糖

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C.ti/而的基因组的DNA文库中分离得到3-磷酸甘油醛脱羧酸酶(GAP)基 因,其DNA序列测定后发现有一 1005hp的ORF片段0从C. utUis中得到的 GAP基㈥克隆至6.5kh £co/U片段。起始密码子上游的Ikb片段(-976? -1,推断+丨为翻译起始位点)作为启动子,用引物在V端加上N?d位点, 在3'端加上Xbal和BamHI位点。终止密码子下游0.7kb片段(+ 1006? + 1728)作为终止子,用引物在V端加上BamHI位点,在V端加上Pst丨位点, 将两片段在pBluescript SK的No丨丨和Pst丨位点间连接,构建得质粒pGAPPTIO (图5 - 15)。含单链莫奈林的0RF的0. 3kb的Dral - Bgl D片段插至pGAPPTIO 的平头Xbal位点和BamHI位点之间构建得PGAPM3。含rDNA片段的表达质 粒如下构建:从pCLRE2 (图5-14)中分离得到的含部分rDNA的1.2kb Apal 片段插至pBluescript SK的Apal位点构建得质粒pCRAl。在pCRAl的Xhol切 割平头端连接上Sphl连接体构建得pCRA2,在pCRAl的Asp7丨8切割平头端 连接上Notl连接体构建得pCRA3。pCRA3的1.2kh rDNA切割为0.5kb和 0. 7kh Notl - Bgl n片段后连接到质粒pUCBgl的Bgl n位点,构建得质粒 pCRA10o其中质粒pUCBgl由pUC19经EcoRI和HindHI酶切,并在Klenow酶 切处理后在切点处连接Bgl D连接体构建得到。质粒pCRA2经Sphl和EcoRI 酶切后,与由PCLRE16分离得到的含CYH抗性基因的1. Ikl, Sphl - KcoRI片 段连接构述得pCLR216。质粒pCRAlO经Xhol和Ps丨I酶切后,与含CYH抗性 基因的丨.1比?311-5&丨1片段(-184?+974)连接,构建得到pCRALll。从 PGAPM3分离得到的含莫奈林表达盒的2. Okb Notl - PstI片段插至pCLR216的 Notl和PstI位点构逑的质粒PCLRM216 (图5 - 16),插至pCRALl 1的Not丨和 PstI位点间构建得到质粒pKMll (图5-16)。C. W/is的URA3基因经与 的ura3突变子减基互补克隆得到,用作整合目标。URA3的801bP ORF 的 区域(+4?+356)和 3'区域(+356 ~+685)分別为 SaH-Bgin 和Bgl丨丨-AsP718片段,这两个片段插至pUC19的Sail和AsP718构建得质粒 pURAl0在pURAl的Hindffl酶切端和Asp718酶切平头端加上Not丨连接体分 别构建得到pURA2和PURA3。从pURA2的5,端分离得Noll - Bgl H片段,从 PURA3的1端分离得BglD - Notl片段,两片段连接至质粒pUCBg丨的Bgin位 点构建pURAlO。含CYH抗性基因的1. lkb PstI - Sail片段插至pURAlO的Sail 和PstI位点间,构建得pURALl 1。含莫奈林表达盒得2. Okb的Notl - PstI片段 插至pURALll的1^11和?8|丨位点间构建质粒pUMll (图5-16)。
5-27),但是在两个亚基的C端尾部却都存在显著的结构差异。植物凝集素的C 端区域伸展至另一条亚基上,而在Neoculin中,NAS和NBS的C端区域均卷曲 成环,并由亚基间二硫键固定。C端区域的这种构象导致了亚基-亚基相互作用 程度的降低以及NAS和NBS中B11和B12间的新环(L11-12)的形成。Tan- credi等曾研究大分子甜味剂中是否存在可探测受体活性部位的“甜味指” (sweet fingers)。研究人员通过研究Neoculin的结构发现,Neoculin中并不存在可 能的“甜味指”,这和Tancredi等人的研究结果一模拟小分子质里甜味剂构象 而设想的“甜味指针”并不一致。
阁1 -16两个假设的甜味受体活性位点的模助(以甜味化合物为模而间接推算的)
图3-19 4-PAS浓度对 6-PAS得率的影响
①全基团保护法;
糖楮 溏挤钠 糖W钙
图4 - 12所示为甜菊苷和挤压膨胀淀粉比例,对转葡糖基得率及环糊精积累 链的影响。挤压膨胀淀粉为50g/L,甜菊苷在10~150g/L变化,最大得率时的 混合比为20:50 (甜菊苷:淀粉质量比>。此后,随甜菊苷浓度增大,得率降低, 这可能是因为受葡糖基供体及酶的限制。甜菊苷浓度增大时,环糊精浓度从 21.2g/L —直降至7.4g/L。因此甜菊苷与挤杻膨胀淀粉质爾比选用0.4: 1.0 为好。
所有的高等植物均能产生黄酮类化合物,它们是食物中的正常成分。根据已 知的知识,可以认为柑橘型二氢查耳酮甜味剂无致诱变活性、致癌性、致龋齿特 性及无明显的毒性,它们很快就被排出体外,其代谢情况与天然存在的母体黄烷 酮类化合物很相似。同时由于它们的甜度大,实际使用时需要萤很小,因此即使 具毒性也不会严重影响它们的应用。

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