秭归县二氢查耳酮
图5 - 18 场强对转化率和C. utUis的存活率的影响
在KOH作用下，氟磺乙酰乙酸胺分解出氟化物，可环化成二氢氧硫氮杂环 二氧化物，由于二氢氧硫氮杂环二氧化物酸性强，与KOH作用易生成盐类。当 然也可用NaOH或Ca (0H)2代替KOH生成相应的盐类产品。安赛蜜的幣个合 成途径见图6-25。
这是英囯Tate & Lyle公司提出的新方法，首先利用芽孢杆菌属的菌株在 30弋下发酵Glc，生成葡萄糖G-6-a (葡萄糖-6-乙酰酯），采用甲醉抽提及 硅胶柱层析分离相结合的方法提纯，然后G-6-a与蔗糖的混合物，在由巨大 芽孢杆菌产生的果糖基转移酶的作用下，生成S-6-a，采用色谱分离的方 法，可分离出70%纯度的S-6-a。将之与Vilsmeier试剂反应对4、厂、6'三个 羟基进行选择性氣化后，再经脱乙酸基反应即得到终产物三氣蔗糖C
从植物中分离得到的Brazzein有几种结构，其中主要构型中的末端氨基酸 是焦谷氨酸（pGlu)[围5-24 (1)]0另一构型除末端没有该氨基酸外，其 余均相同，称为de8-pGlul -Brazzein [图5-24 (2)]t它的甜度是主要构型 的Brazzein的2依。按des - pGlul - Brazzein的氣基酸序列采用大肠杆菌优选 密码子合成的基因如图5-24 (3)所示。合成的Bra^ein基因若直接克隆至 质粒 pET-3a、pET-9a、pET - 1 la 和 pET - 16b 得到的 Brazzein 表达水平均 很低，只有pET-3a和pET-9a得到少量可溶的Brazzein。pET载体通常能使 外源可溶性蛋白如葡萄球菌核酸酶表达，葡萄球菌核酸酶与Brazzein的显著不 同是葡萄球菌核酸酶的氨基酸数目>100，且没有半胱氨酸或半胱氨酸含S很 低。若采用两种基因融合生产目的蛋白融合体的表达水平较髙，因此将 Brazzein合成基因插人葡萄球菌核酸酶表达系统。该策略经大肠杆菌生产鸟类 卵黏蛋白区证实很成功。
目前用基W工程生产嗦吗甜的研究很活跃，表5 - 6所示为其中一些研究结 果。许多研究从学术意义上说非常成功，但产率还无法与从植物提取的相竞争。 嗦吗甜在微生物中的表达水平需达到lg/L,其成本才能与天然提取的相当，目 前还没有一种重组嗦吗甜达到这个表达水平。
(三）酶反应的最优条件
近年来，人们发现一种新型脲衍生物，即对硝基苯羧化衍生物，具有一定甜 味。典型代表为Simsan (/V -对硝基-苯基-甲酰胺基-丙氨酸钠），其甜度
浓度/( g/100m Lflm')
(四）以异氰酸环己酯和硫酸为原料
根据Vignais等人的报道，甜菊苷在小鼠肝脏线粒体中具有抑制氧化、磷酸化 的作用。Kelmer Bmcht等人报道甜菊醇和异甜菊醇会影响完整细胞线粒体的功能。 甜菊苷和甜菊醇生糖苷穿过细胞膜的速度很慢，对不完整细胞的线粒体不显示任何 活性。然而，有人发现糖苷配基和甘油配基会抑制血浆隔膜（plasma membrance) 的己糖载体，这表明所有的甜菊苷衍生物均会影响碳水化合物的代谢。
